[发明专利]一种简便快速诱导纤毛分化的气道上皮细胞培养方法

权利要求书

1.一种简便快速诱导纤毛分化的气道上皮细胞培养方法，包括以下步骤

A、在无菌常温环境下从哺乳动物体内分离气道组织；

B、将气道组织置于含有常温磷酸盐缓冲液的培养皿中漂洗；

C、将漂洗后的气道组织横放并纵向分离成为多个独立的环状气道组织；

D、将分离的独立环状气道组织平铺于培养器皿中，并加入细胞培养基；

E、将培养器皿置于37摄氏度二氧化碳培养箱中培养1至2天后取出即得。

2.如权利要求1所述的一种简便快速诱导纤毛分化的气道上皮细胞培养方法，其特征在于：在将气道组织冲洗并分离成独立环状气道组织的过程中，气道组织用常温磷酸盐缓冲液漂洗至气道腔内无粘液及其它杂质，将气道横向平放在装有磷酸盐缓冲液的培养皿中，并使用灭菌后的手术剪将气道纵向剪切分离成为多个独立的环状气道组织，剪切分离后的环状气道组织厚度以1毫米为宜。

3.如权利要求1所述的一种简便快速诱导纤毛分化的气道上皮细胞培养方法，其特征在于：使用尖镊将分离后的环状气道组织小心夹起，并保证不损伤气道环的内侧，将环状气道横向平铺于6孔板或其它培养器皿中，其中每一个分离的独立环状气道组织可种植在一个培养介质中，也可将多个环状气道组织共同放置于一个培养介质中加快细胞在一个培养介质中生长汇集速度，同时从孔的周边加入500μl细胞培养基以保证每一个环状气道组织不至于悬浮起来且又能够被完全浸没在细胞培养基中，显微镜下放大400倍观察可看到环状组织内侧有大量纤毛节律性摆动，将培养器皿放置于37摄氏度二氧化碳培养箱中培养，24至48小时后取出。