[发明专利]一种基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒，所述试剂盒中的试剂包括裂解液、结合液、洗涤液和核酸洗脱液，其特征在于：

所述裂解液含有十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和曲拉通X-100；

所述结合液含有异丙醇；

所述洗涤液包括洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和洗涤液Ⅲ，其中：所述洗涤液Ⅰ含有盐酸胍、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和异丙醇；所述洗涤液Ⅱ含有乙酸钠和异丙醇；所述洗涤液Ⅲ含有异丙醇；

所述核酸洗脱液含有三羟甲基氨基甲烷。

2.根据权利要求1所述的基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述裂解液中，十二烷基硫酸钠的质量体积比浓度为0.5%-3%，乙二胺四乙酸的浓度为10-40mmol/L，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10-40mmol/L，氯化钠的浓度为1-5mol/L，曲拉通X-100的体积比浓度为0.5%-3%，余量皆为去离子水；使用氢氧化钠和盐酸调节所述裂解液的pH值为7.0-9.0；

在所述结合液中，异丙醇浓度大于99.9%。

3.根据权利要求1所述的基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述洗涤液Ⅰ中，盐酸胍的浓度为2-10mol/L，乙二胺四乙酸的浓度为10-40mmol/L，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10-40mmol/L，氯化钠的浓度为1-5mol/L，异丙醇的体积比浓度为50%-70%，余量皆为去离子水；使用氢氧化钠和盐酸调节所述洗涤液Ⅰ的pH值为7.0-9.0。

4.根据权利要求1所述的基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述洗涤液Ⅱ中，乙酸钠的浓度为1-5mol/L，异丙醇的体积比浓度为50%-80%；在所述洗涤液Ⅲ中，异丙醇的体积比浓度为50%-100%。

5.根据权利要求1所述的基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒，其特征在于：在所述核酸洗脱液中，三羟甲基氨基甲烷的浓度为1-4mmol/L；使用氢氧化钠和盐酸调节所述核酸洗脱液的pH值为7.0-9.0。

6.权利要求1-5任一项所述基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒的应用，其特征在于包括以下步骤：

①在EP管中加入动物组织、裂解液和蛋白酶K并匀浆，于56℃水浴孵育30分钟后离心；

②离心后的上清液转移至新的EP管中，加入磁珠和结合液，结合时间10分钟；

③使用磁铁将磁珠吸附至管壁，弃去EP管内所有液体；

④在EP管中加入洗涤液Ⅰ，混匀后，使用磁铁将磁珠吸附至管壁，弃去管内所有液体；

⑤在EP管中加入洗涤液Ⅱ，混匀后，使用磁铁将磁珠吸附至管壁，弃去管内所有液体；

⑥在EP管中加入洗涤液Ⅲ，混匀后，磁铁将磁珠吸附至管壁，弃去管内所有液体；

⑦在EP管中加入核酸洗脱液，于56℃水浴下洗脱5分钟，使用磁铁将磁珠吸附至管壁，将洗脱液转移至新的EP管内，在-20℃保存备用；

其中：加入的裂解液与动物组织的体积质量比为30μL:1mg-6μL:1mg；加入的磁珠与结合液的体积比为1:10-1:20，洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ、洗涤液Ⅲ分别与裂解液的体积比为1:1-3:1，核酸洗脱液与裂解液的体积比为1:1-1:5。

7.根据权利要求6所述的试剂盒的应用，其特征在于：所述EP管容量为2mL，加入的试剂为：10μL浓度20mg/mL的蛋白酶K，动物组织50mg，裂解液300μL，磁珠20μL，结合液300μL，洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和洗涤液Ⅲ各600μL，核酸洗脱液100μL。