[发明专利]一种检测三唑醇的试纸条及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及三唑醇的检测，具体是一种用于检测三唑醇的胶体金试纸条，其特别适用于烟液中三唑醇残留的检测。

背景技术

三唑醇（triadimenol，C₁₄H₁₈CN₃O₂）又名百担，化学名称为1-(4-氯苯氧基)-3,3-二甲基-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-丁醇，是一种低毒、广谱、高效的内吸性杀菌剂，其主要作用机理是抑制赤霉素和麦角固醇的生物合成进而影响细胞分裂速率，对烟草根黑腐病、白粉病、蛙眼病等真菌病害都有很好的防治效果。。因此，在我国农业生产中的应用非常广泛，适用于麦类、玉米、高粱、果蔬、烟草等农作物。

烟草中三唑醇残留是国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）密切关注的，且近年来在我国某些产地烟草中的检出率也较高。随着三唑醇的广泛使用和人们对食品和农作物安全的重视，三唑醇在食品及农作物中的残留也受到了高度关注。2007年1月欧盟公布了进口的中国产蜂蜜中检测出三唑醇残留量超标的预警通报。同年5月，日本厚生劳动省查出我国1批输日胡萝卜中三唑醇残留量超标，由此日方要求对我国出口日本的胡萝卜中三唑醇项目实施50%监控检查。目前，很多国家已明确限定该农药在食品中的最高残留限量，如日本规定三唑醇在食品中的残留限量（MRL）为0.2~0.5 mg/kg；欧盟规定三唑醇在豆类中的MRL为0.1 mg/kg；国际食品法典委员会（CAC）规定西红柿中三唑醇的MRL为0.5 mg/kg。为避免三唑醇残留对人体造成危害以及突破国外贸易壁垒，建立简单、快速、准确、可靠的烟草中三唑醇类残留量的检测方法很有必要。

目前常用的三唑醇检测方法主要有气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、气-质联用法（GC-MS）和液-质联用法（LC-MS）。采用这些分析方法需要昂贵的仪器和专门的技术人员，样品前处理过程复杂且花费高、费时长，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种不受检测设备限制并且能够实现对大批量样品进行快速检测的产品和方法成为迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的检测三唑醇的方法存在的对设备依赖性高，并且不能够实现对大批量样品的快速检测的特点，提供一种操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、不受检测设备限制的试纸条及其制备方法和应用，以实现对大批量的三唑醇样品进行快速检测和现场监控。

为了实现本发明的目的，本发明提供了一种检测三唑醇的试纸条，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其中，所述反应膜上具有包被有三唑醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有三唑醇单克隆抗体-胶体金标记物。

所述三唑醇半抗原-载体蛋白偶联物由三唑醇半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白，所述三唑醇半抗原是由三唑酮与氨基己酸在有机碱1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯的催化下进行酮胺的缩合反应得到，其分子结构式为：

。

所述三唑醇单克隆抗体是以三唑醇半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述羊抗鼠抗抗体是以鼠源抗体为免疫原对山羊进行免疫制备获得。

所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

一种制备上述试纸条的方法，包括以下步骤：

1）制备喷涂有三唑醇单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有三唑醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1）将三唑酮与氨基己酸在有机碱1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯的催化下进行酮胺的缩合反应，制备三唑醇半抗原；

2）将三唑醇半抗原与载体蛋白偶联，制备三唑醇半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用三唑醇半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌三唑醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株；