[发明专利]一种特异性抑制MAGEA1基因表达的小干扰RNA及其应用

说明书

本发明提供了一种特异性抑制MAGEA1基因的小干扰RNA及其应用。本发明小干扰RNA的正义链和反义链序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示。该小干扰RNA干扰的MAGEA1靶序列如SEQ ID NO.3所示，其通过作用于MAGEA1靶序列实现抑制MAGEA1基因表达，可用于制备调节细胞或生物体中MAGEA1基因表达的药物，也可用于制备治疗肿瘤、尤其是黑色素瘤的药物，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说涉及一种特异性抑制MAGEA1基因表达的小干扰RNA及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是指是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象，RNA分子通过破坏特定的mRNA，以抑制某种基因表达的生物学过程。该技术具有以下几点优势：1高效性；2特异性；3位置效应；4高稳定性；5可传播性；6浓度时间依赖性。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，该技术迅速成为基因功能研究和基因治疗研究领域最受关注的研究工具之一，已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。

恶性黑色素瘤(malignant melanoma，MM)：是源自于黑色素细胞的一种恶性肿瘤，好发于皮肤，恶性程度高，治疗难度大。虽然黑素瘤仅占全部皮肤肿瘤的4％,但却占皮肤肿瘤死亡人数的80％,是皮肤肿瘤中死亡率最高的一种恶性肿瘤。美国国家癌症研究所(NCI)的数据显示，在2003-2007年间，患病人数为每年20.1人/10,000人。截止到2010年，估计有68130个患者被诊断患有黑色素瘤，其中8700个患者将因此丧生(http://www.cancer.gov/)。恶性黑色素瘤的发生率在全世界范围内正在不断地上升，包括以前发病率低的地区，它已成为一种严重威胁人们健康的恶性疾病。在中国黑色素瘤患者有逐年增高的趋势。北京市八城区统计资料显示，2000年MM发病率为0.2例/10万，到了2004年已达1例/10万。根据中国临床肿瘤协会(CSCO)黑色素瘤专家委员会发表的《中国黑色素瘤诊治指南(2011版)》，我国每年新发病例约2万例，已经成为了严重危及我国人民健康的疾病之一。

Melanoma antigen family A1(MAGEA1)是MAGE基因家族成员之一，该家族共有12个同源基因，编码蛋白序列具有50％-80％的相似性，而启动子区和第一外显子区差异相对比较大。MAGEA1是1991年由Vander Bruggeon等人从一例患有黑色素肿瘤但是临床表现良好的病人身上所分离得到的。MAGEA1基因所编码的蛋白能够被人体毒性T淋巴细胞克隆(CTL克隆)识别。MAGEA1基因所编码的蛋白可以与SKIP蛋白发生相互作用并且通过招募组蛋白去乙酰酶(HDAC-1),从而调控某些特定基因的转录。MAGEA1染色质定位于人类X染色体q28区域，该基因全长1755bp，主要由3个外显子和2个内含子组成。编码蛋白309个氨基酸长度，一般认为MAGEA1在细胞内主要分布在细胞核和锚定在细胞膜上，正常情况下，MAGEA1仅在雄性生殖系统和胎盘表达，通常在恶性肿瘤细胞中不表达，其原因是该基因的启动予处CpG岛的甲基化。近年来研究发现在多种肿瘤当中，包括黑素瘤、乳腺癌、神经母细胞瘤、膀胱癌以及非小细胞肺癌中也存在MAGE-A1基因的表达，因此MAGEA1被称作癌症生殖(cancer-germline,CG)基因或者肿瘤睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)基因。MAGEA1编码的蛋白在肿瘤细胞表面可被细胞毒性T淋巴细胞识别，经过抗原递呈以及机体免疫应答，产生体液免疫和细胞免疫的应答效应，因此MAGEA1基因被视为潜在的肿瘤疫苗靶点。

由于当前对MAGEA1的研究进展有限，其在生殖系统和肿瘤中的生物学功能还不是非常清楚，但可以肯定的是，MAGEA1编码的分子参与了多种分子功能调节并发挥一系列作用。下调MAGEA1的表达，可以有效抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，目前针对下调MAGEA1的表达研究，特别是特异性抑制MAGEA1表达的小干扰RNA报道较少。

发明内容