[发明专利]一种特异性抑制CTGF基因表达的小干扰RNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说涉及一种特异性抑制 CTGF基因表达的小干扰RNA及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术是指是指在进化过程中 高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)诱发的、同 源mRNA高效特异性降解的现象，RNA分子通过破坏特定的mRNA， 以抑制某种基因表达的生物学过程。该技术具有以下几点优势：1高效 性；2特异性；3位置效应；4高稳定性；5可传播性；6浓度时间依赖 性。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以 该技术迅速成为基因功能研究和基因治疗研究领域最受关注的研究工 具之一，已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领 域。

恶性黑色素瘤(malignantmelanoma，MM)：是源自于黑色素细胞 的一种恶性肿瘤，好发于皮肤，恶性程度高，治疗难度大。虽然黑素瘤 仅占全部皮肤肿瘤的4％,但却占皮肤肿瘤死亡人数的80％,是皮肤肿 瘤中死亡率最高的一种恶性肿瘤。美国国家癌症研究所(NCI)的数据 显示，在2003-2007年间，患病人数为每年20.1人/10,000人。截止到 2010年，估计有68130个患者被诊断患有黑色素瘤，其中8700个患者 将因此丧生(http://www.cancer.gov/)。恶性黑色素瘤的发生率在全世界 范围内正在不断地上升，包括以前发病率低的地区，它已成为一种严重 威胁人们健康的恶性疾病。在中国黑色素瘤患者有逐年增高的趋势。北 京市八城区统计资料显示，2000年MM发病率为0.2例/10万，到了2004 年已达1例/10万。根据中国临床肿瘤协会(CSCO)黑色素瘤专家委员 会发表的《中国黑色素瘤诊治指南(2011版)》，我国每年新发病例约2 万例，已经成为了严重危及我国人民健康的疾病之一。

结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)是一种 新发现可刺激成纤维细胞增殖和胶原沉积生长因子，是高度保守CCN (CTGF、Cef10/cyr61和Nov缩写)多肽家族中成员。CTGF蛋白为肝 素结合型，含349个氨基酸，富含半胱氨酸，其分子量约为36～38kD， 可由成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞合成分泌。成年哺乳动物心、 脑、肾、肺、肝胎盘中均有表达。人类CTGF基因定位于染色体6q23。 1，包括5个外显子，4个内含子。起始位点为ATG，其3′端包含三个 ATTTA位点。CTGF蛋白38个保守半胱氨酸残基分成两个节段，其中 22个在N末端区，16个在C末端区，4个主要蛋白结构区为胰岛素样 生长因子结合蛋白区、vonWille-brand因子C型重复、血小板反应蛋白 (thrombospondin)I型重复以及生长因子半胱氨酸群，这些区域都由 独立外显因子编码。CTGF广泛表达于人类多种组织器官中，在病理情 况下，其过度表达与某些增生性或纤维化疾病发生发展密切相关，如胶 质瘤、胰腺癌、甲状腺癌、乳腺癌，胃癌、硬皮病、肾纤维化、肝硬化、 肺纤维化、动脉粥样硬化等。CTGF拥有多种生物学功能，可以调节肿 瘤细胞增殖、分化、有丝分裂、粘附、凋亡、胞外基质产生、生长抑制 和多细胞类型的迁移，因而可以在发育、损伤愈合和疾病中发挥重要作 用。同时该基因在黑素瘤的恶化过程中起重要的驱动作用。下调CTGF 的表达，可以有效抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够特异性抑制CTGF基因表达的小 干扰RNA(siRNA)及其应用。

本发明根据RNAi发生原理，设计并合成了针对CTGF基因的小干 扰RNA，其GC含量为47.37％，且正义链和反义链的长度均为19nt。

进一步地，本发明的小干扰RNA双连体分子的正义链和反义链序 列分别为：

正义链：5’-CGCUGUACUACAGGAAGAUdTdT-3’，(SEQID NO.1)

反义链：5’-TdTdGCGACAUGAUGUCCUUCUA-3’(SEQID NO.2)。

本发明提供的上述小干扰RNA，能够特异性下调细胞或生物体中 CTGF基因的表达量。