[发明专利]一种检测便隐血的胶体金双联试纸条及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种检测便隐血的胶体金双联试纸条及其制备方法。

(二)背景技术

粪便隐血是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。粪便隐血检测是粪便常规检验项目之一，对于消化道出血及消化道肿瘤的诊断和鉴别诊断有重要的参考价值，常作为诊断消化道出血的筛选指标。

粪便隐血检测通常有化学法和免疫法两种。以愈创木酯、联苯胺、邻甲苯胺、还原酚酞、四甲基联苯胺等色原性物质为主体的化学检测方法，其中以邻甲苯胺化学法使用最多。化学法虽然费用低廉﹑反应快速﹑结果容易判断，但是易受多种因素干扰﹑易出现假阳性。基于特异性抗原抗体反应的免疫学方法，如乳胶免疫化学凝集法、ELISA法、免疫层析法等逐渐在临床广泛使用，其中免疫层析法被世界卫生组织和世界胃镜检查协会推荐用于粪便隐血检测。

目前研究较多方法即为便隐血试剂双联检测法，是特异性检测人粪便中的血红蛋白(Hb)和转铁蛋白(Tf)的检测方法。由于转铁蛋白在肠道内的稳定性及抗菌能力都高于血红蛋白，克服了血红蛋白易被胃酸、细菌降解消化的缺点，提高了在上消化道失血检测的阳性率。同时，由于在血液中Hb和Tf的比值为51.2/1，而粪便中Hb和Tf的比值为5.4/1，因此转铁蛋白法的敏感性高于血红蛋白胶体金检测法。而在遗传性无转铁蛋白血症，各种恶性疾病，炎症为主的多种疾病(如手术、创伤、心肌梗死、感染等)均可导致转铁蛋白值低下的情况中，Hb检测能弥补Tf检测的不足。所以，联合检测Hb和Tf法，灵敏度高、特异性强，对检测消化道出血的临床意义可起到优势互补的作用。

万华普曼公司率先研发出TF/Hb双联胶体金诊断试纸检测粪便隐血的新方法，将抗人TF抗体和抗人Hb抗体整合在同一试纸带上(两张试纸条拼接在一起，有两个加样口)，可同步检测TF与Hb，互不干扰，二者优势互补，但其Hb检出限有限(经测试，20μg/ml能检出，1μg/ml不能检出)，灵敏度和检出限有待进一步提高。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种灵敏度高和检出限高、只需一次加样的检测便隐血的胶体金双联试纸条及其制备方法。

本发明采用的技术方案是：

一种检测便隐血的胶体金双联试纸条，由底衬以及粘贴在底衬上的样品垫、标记垫、包被膜和吸水纸组成，其特征在于：所述样品垫、标记垫、包被膜和吸水纸按层析方向顺次搭接粘贴在底衬上；

所述标记垫上包含有胶体金标记的鼠抗人Hb单克隆抗体Hb1和鼠抗人Tf单克隆抗体Tf1，鼠抗人Hb单克隆抗体Hb1浓度为5～20μg/mL，鼠抗人Tf单克隆抗体Tf1浓度为5～20μg/mL；

所述包被膜上依次设置有检测线一、检测线二和质控线，检测线一和检测线二包被有与标记垫中的抗体具有不同表位的鼠抗人Hb单克隆抗体Hb2和鼠抗人Tf单克隆抗体Tf2，质控线包被有鼠抗IgG；检测线一包被的鼠抗人Hb单克隆抗体Hb2的浓度为0.5～2mg/mL，用量按膜包被液量为30μl/27～35cm(采用专门的包膜机进行喷涂，设置速度为30μl/27～35cm，以1μl/cm为宜)；所述检测线二包被的鼠抗人Tf单克隆抗体Hb2的浓度为0.5～2mg/mL，用量按膜包被液量为30μl/27～35cm；所述质控线包被的羊抗鼠IgG浓度为0.5～2mg/mL，用量按膜包被液量为30μl/27～35cm。

所述胶体金颗粒的紫外扫描最大吸收波长为500～550nm(500～550nm吸收峰值3.0Abs，450nm是2.1Abs，600nm是1.5Abs)。

检测线一、检测线二和质控线间隔距离为3～5mm。

一种制备所述胶体金双联试纸条的方法，所述方法包括：