[发明专利]一种从黄鳝体表粘液提取基因组DNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及黄鳝基因组DNA提取方法检测，具体地说，涉及一种如何从黄 鳝体表粘液提取基因组DNA的方法。

背景技术

黄鳝(Monopterusalbus)是我国的一种重要的经济鱼类之一，属于硬骨鱼 纲，合鳃目，合鳃科，黄鳝属。受环境污染及滥捕的影响，黄鳝的自然资源量 不断下降，而人工养殖因受苗种繁殖的制约，尚难以形成规模，所以对黄鳝遗 传育种的研究一直是黄鳝主要方向。

随着遗传育种研究的不断深入，从DNA水平分析黄鳝遗传多样性及优良性 状相关的分子标记寻找已成为热点。基因组DNA的提取是进行研究的基本前提， 取肌肉、肝脏等组织的方式难以使鱼类存活下来。因此一些鱼类可以通过采用 鳍条或鳞片的方式来提取其DNA，从而可以保证鱼类继续存活。而体重大于100 g的鱼，从尾静脉采血0.5mL也不会对鱼的生存造成威胁。但是由于黄鳝即无 鳞片，也无鳍条，抽取少量的血液后的黄鳝很快就会死亡。因此要想进行黄鳝 家系构建，优良性状分子标记寻找等，不仅要知道对亲本基因型，而且还要求 亲本能够存活下来，以便与子代的出现的某些性状进行比较。因此，寻找一种 可以在黄鳝亲本活着的情况下提取其DNA的方法对于黄鳝杂交育种工作就显得 尤为重要了。

为了保证能够在黄鳝存活的情况下提取其DNA，本发明研究尝试从黄鳝体 表粘液中提取DNA，同时观察采集粘液的后的黄鳝经过一个月的饲养的死亡率。 这就为研究黄鳝遗传育种提供了重要方法。

发明内容

为了解决现有技术所存在的上述不足，本发明提供一种从黄鳝体表粘液提 取基因组DNA的方法，本发明方法简单、高效、便捷，且不会对黄鳝造成损伤， 不影响其存活能力和生产性能。

本发明的技术方案如下：

一种从黄鳝体表粘液提取基因组DNA的方法，包括以下步骤：

1)黄鳝体表粘液的采集：无创伤地从黄鳝体表采集体表粘液；

2)黄鳝体表粘液基因组DNA的提取。

优选地，步骤1)包括用干净的卫生纸无创伤地擦拭黄鳝体表粘液，获得黄 鳝体表粘液基因组DNA样品；

优选地，步骤1)还包括将含有黄鳝粘液的卫生纸剪碎放入灭菌离心管中加 入无水乙醇(例如500微升)，保存于零下20度冰箱中；可以长久保存黄鳝体 表粘液基因组DNA样品，便于随用随取；

优选地，步骤2)包括将黄鳝体表粘液基因组DNA样品加入STE，用蛋白 酶K消化，然后用苯酚和氯仿除去蛋白，用乙醇沉淀后，12000r/min离心沉淀 DNA，弃上清，吹干沉淀，用双蒸水溶解。

具体地，步骤2)包括将黄鳝体表粘液基因组DNA样品适量，置于灭菌离 心管中，加入STE500ul，再加入10ul的PK于55℃恒温消化，至消化完为止； 然后加入Tris饱和的酚(PhenolStaturated)500ul，震荡5-6min，12000r/min离 心10min，取上清液，再重复一次(即加入Tris饱和的酚500ul，震荡5-6min， 12000r/min离心10min)，

取上清液300ul，加入异丙醇300ul，震荡，12000r/min离心10min，弃去上 清液；加入无水乙醇100ul，然后弃乙醇清洗，再重复一次(即加入无水乙醇100ul， 然后弃乙醇清洗)；加入无菌水50ul溶解，溶解后加入200ul乙醇，混匀， 12000r/min离心10min；弃上清液，阴干；然后加入双蒸水30ul，即得含黄鳝体 表粘液基因组DNA的溶液。

上述从黄鳝体表粘液中提取基因组DNA的方法，还包括用黄鳝actin基因 引物检测，验证是否为黄鳝基因组DNA。

本发明所述卫生纸也可用吸水性能相近的纸巾纸、餐巾纸、纸手帕等代替； 关于卫生纸等的相关要求可参考国家标准《GB/T20808-2011纸巾纸》。

本发明同现有技术相比，具有如下优点：

1、本发明采用黄鳝体表粘液作为基因组DNA提取材料，对黄鳝机体不造 成任何损伤；保护了取样个体的组织完整性，通过不长的恢复期个体即可从应 激状态中恢复过来，并可以长期多次取样；

2、本发明方法将黄鳝体表粘液基因组DNA提取材料直接固定于无水乙醇 中，方便保存；