[发明专利]磷脂酶、编码基因及其制备方法

说明书

本发明涉及磷脂酶、编码基因及其制备方法。具体而言，本发明一种分离的多肽，所述多肽含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成。本发明还涉及编码所述多肽的多核苷酸序列，含所述多核苷酸序列的核酸构建物，含所述核酸构建物的宿主细胞。

技术领域

本发明涉及磷脂酶、编码基因及其制备方法。

背景技术

磷脂酶(Phospholipase，PL)是生物体内存在的能水解甘油磷脂的酶，根据磷脂酶水解甘油磷脂的位点(Richmond G.S.等，Int.J.Mol.Sci.2011，12:588-612)不同，可将磷脂酶分为磷脂酶A1(Phospholipase A1，PLA1)、磷脂酶A2、磷脂酶B(Phospholipase B，PLB)、磷脂酶C(Phospholipase C，PLC)、磷脂酶D(Phospholipase D，PLD)以及溶血磷脂酶A，如图10所示。图10中的R₁和R₂为脂肪酰基，R₃为氨基醇类如胆碱、乙醇胺、肌醇以及丝氨酸等。

PLA1能够水解二脂肪酰基磷脂的Sn-1位酰基酯键，产生溶血磷脂和脂肪酸。PLA2则是能够水解Sn-2位的酰基酯键，产生溶血磷脂和脂肪酸。PLB则是能水解二脂肪酰基磷脂的Sn-1位和Sn-2位的两个酰基酯键产生甘油磷酰胆碱和游离脂肪酸的磷脂酶，该酶也同时具有溶血磷脂酶的活性。PLC是能够水解甘油骨架和磷酸基之间的磷酸酯键产生二磷脂酰甘油和磷酸极性醇酯(如磷酸胆碱、磷酸乙醇胺、磷酸肌醇等)。PLD则是水解磷酸基和氨基醇之间的磷酸酯键生成磷脂酸和氨基醇。溶血磷脂酶A则是指能够水解溶血磷脂的Sn-1位或Sn-2位的脂肪酰基酯键，产物是甘油磷酸胆碱和脂肪酸。

磷脂酶是一种广泛存在于各种生物体中的酶类，譬如人体中就有PLA2、PLB、PLC等多种类型的磷脂酶。因为微生物具有生产周期短、生长条件简单、生产效率高等特点，其一直是工业酶制剂领域研究的重点。因此关于各种微生物磷脂酶的报道也非常多，如能够产PLA1的微生物有：

液化沙雷氏菌(Serratia liquefaciens)(CN103074290)、纽波特沙门氏菌(Salmonella newport)、黄白链霉菌(Streptomyces albidoflavus)(Kazutaka M.等，J.Structural.Biology.2013，182:192-196)、(Saxena M.等，Folia Microbiol.1989，34:195-201)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、米曲霉(Aspergillus oryzae)(ShibaY.等，Biosci.Biotechnol.Biochem.2001，65(1):94-101)、黑曲霉(Aspergillus niger)(US5378623)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(赵梦梦等，中国生物制品学杂志.2012，25(7):901-905)等。

能够产PLA2的微生物有：

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)(Ling L.等，BMC Microbio.2013，13:271-284)、紫红链霉菌(Streptomyces violaceoruber)(Sugiyama M.等，J.Biol.Chem.2002，277(22):20051-20058)、米曲霉(Aspergillus oryzae)(CN1328375)、变铅青链霉菌(Streptomyceslivdans)(CN102226165)、超嗜热古菌Aeropyrum pemix(卢冬梅等，微生物学通报.2006，33(5):35-38)等。

能够产磷脂酶B的微生物有：