[发明专利]抗人Delta like 4单克隆抗体及其应用

说明书

本发明利用杂交瘤技术，以重组人Delta like 4（rhDll4）为抗原，免疫BALB/c小鼠，获得高亲和力和生物学活性的抗人Delta like 4单克隆抗体。本发明提供的单克隆抗体的特征在于：可以与rhDll4特异性结合；可以阻断rhDll4对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的抑制。本发明具体地公开了抗人Delta like 4单克隆抗体的筛选、其制备方法及其重链可变区和轻链可变区的核苷酸和氨基酸序列，包括对应于互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的核苷酸和氨基酸序列。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种新的可与人新生血管内皮顶端细胞表面的Delta like 4(Dll4)特异结合的高亲和力单克隆抗体，以及抗Dll4单克隆抗体可变区序列及其制备方法。

背景技术

1975年Koehler和Milstein创立了体外杂交瘤技术得到了鼠源性单克隆抗体，开始了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代。与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有无可比拟的优越性，它具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强、成本低并可大量生产等优点。单克隆抗体的这些特征使它成为未来治疗学上研究的热点。

肿瘤的生长和迁移需要有宿主的血管延伸至肿瘤组织内部。由于Notch信号在血管发育和生成中发挥着重要的调节作用，因此，Notch信号通路的原件可以成为治疗肿瘤血管生成的靶标。在很多肿瘤血管中都可以观察到Dll4的高表达，研究表明，Dll4被鉴定为有效的抗肿瘤血管生成的重要靶标。

近年的研究发现，Dll4/Notch参与肿瘤血管的生成和肿瘤干细胞的更新。通过对给予抗Dll4抗体或Dll4-Fc等融合蛋白，可以阻断Dll4/Notch信号的传导，可以抑制多种实体瘤在小鼠体内的生长。在这些肿瘤组织内部，虽然肿瘤血管的密度增加，但是这些新生成的血管缺乏与成熟的血管丛有效的融合，不能为肿瘤组织提供血流，因此可以有效地抑制肿瘤的生长。有研究表明，抗Dll4单克隆抗体甚至可以杀伤对抗VEGF-A抗体拮抗的肿瘤。Dll4/Notch参与一系列癌症干细胞的分化、增殖、更新和维持癌症干细胞的表型，如，乳腺癌、胚胎脑癌、胶质瘤、肝癌和前列腺癌。Hoey等联合使用抗人Dll4单克隆抗体和抗鼠Dll4单克隆抗体对荷瘤NOD/SCID小鼠进行治疗发现，通过降低小鼠瘤组织内部肿瘤干细胞的比例，抑制肿瘤组织的生长，降低肿瘤细胞的转移和延迟肿瘤的复发。

本发明以重组人Dll4(rhDll4)胞外区为抗原，通过杂交瘤技术筛选制备了高亲和力的抗Dll4特异性单克隆抗体，并通过体内外实验证明了其高效生物学活性。

发明内容

发明目的

本发明提供一种具有促进无功能血管生成以及抗肿瘤药效的抗Dll4特异性单克隆抗体。本发明单克隆抗体的特征为特异性结合Dll4胞外区，阻断Dll4-Notch信号通路。

技术方案

本发明提供了一种抗Dll4单克隆抗体，及其相关蛋白质和核苷酸序列。

本发明提供了一种抗人Dll4单克隆抗体，以Dll4胞外区段为抗原，通过杂交瘤技术，筛选制备高亲和力的抗Dll4特异性单克隆抗体，具有潜在医学和药学价值。

本发明提供制备上述单克隆抗体的制备方法。

本发明同时提供一种DNA分子，该DNA分子含有SEQ ID NO:1，17，33或49所示的编码所述单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列，以及SEQ ID NO:9，25，41或57所示的编码所述单克隆抗体轻链可变区的核苷酸序列。

本发明提供一种抗Dll4单克隆抗体，它包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，重链可变区具有SEQ ID NO:2，18，34或50所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ IDNO:10，26，42或58所示的氨基酸序列。