[发明专利]一种比较不同土壤微生物污染诱导群落耐性的方法

权利要求书

1.一种比较不同土壤微生物污染诱导群落耐性的方法，其特征在于：

采用Microresp设备分别测定两种以上土壤诱导呼吸对污染物的效应，计算诱导呼吸强度减少50％的污染物浓度(IC₅₀值)来比较不同土壤微生物群落诱导耐性的大小，数值越大说明该土壤对此污染物的微生物群落诱导耐性越大，反之越小。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：

采用Microresp设备进行每种土壤测定步骤具体如下：

1)采集土壤样品，过孔径2mm的筛，取过筛样品，调节土壤含水量为田间持水量的40％；

2)检测板制备：于55-60℃的条件下，将含有甲酚红(12.5mg·L^-1)、氯化钾(150mmol·L^-1)和碳酸氢钠(2.5mmol·L^-1)混合制成的指示剂100mL溶解在50mL的含有质量含量3％的Noble琼脂液中，然后使用多通道移液枪将以上溶液添加到检测板的微孔中，每孔150μL，室温条件下凝固后待用；

3)用去离子水把葡萄糖制备成储备液(93.6g·L^-1)，用多通道移液枪将其添加到深孔板的微孔中，每孔25μL；再将不同浓度污染物按照从小到大的顺序添加到深孔板的微孔中，每孔加入25μL，所述不同浓度污染物包括对照(不添加污染物，只添加25μL去离子)在内至少5个以上不同浓度梯度，且最高浓度应大于等于使得土壤诱导呼吸减少50％以上时的浓度；

4)用加样装置分别向步骤3)获得的已添加葡萄糖和污染物(包括对照)的微孔中添加步骤1)获得的待测土壤样品，每孔加入0.850g；

5)570nm或590nm波长下测定密封前检测板微孔的吸光值；

6)将深孔板和检测板孔口一一相对，用垫圈连接，再用夹子固定封闭；

7)将固定封闭后的深孔板和检测板在培养箱25℃条件下培养6小时；

8)570nm或590nm波长下再次测定检测板微孔的吸光值；

9)诱导呼吸强度(CO₂产生率)根据下述公式计算：

CO₂(％)＝A+B/(1+D×Ai₆)

式中，A＝–0.2265，B＝–1.606，D＝–6.771，Ai₆为规范化的样品添加碳源并培养6h后检测板的吸光值；

采用下述公式将数据规范化：

Ai₆＝(At₆/At₀)×Mean(At₀)

式中，At₆为样品添加碳源并培养6h后检测板的吸光值；At₀为样品未添加碳源培养时检测板的吸光值，Mean(At₀)为样品未添加碳源培养时整个检测板所有微孔吸光度的平均值；

CO₂产生率[μg·(g·h)^-1]根据下式计算：

CO₂产生率＝[CO₂(％)/100]×L×(44/22.4)×(12/44)×[273/(273+T)]/(W×U)/t

式中，T为培养温度(25℃)，L为检测板单个微孔的体积(945μL)，W为土壤鲜重(0.850g)，U为土壤含水率(40％)，t为培养时间(6h)。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：

计算诱导呼吸强度减少50％的污染物浓度(IC₅₀值)的具体过程如下：以诱导呼吸强度和添加污染物浓度分别为横纵坐标作图，采用数据分析软件模拟污染物浓度与CO₂产生率的相关方程，并以对照为100％诱导呼吸强度计算土壤诱导呼吸强度减少50％的污染物浓度(IC₅₀)。

4.按照权利要求1或3所述的方法，其特征在于：

通过对比不同土壤的IC₅₀值即可比较不同土壤微生物群落诱导耐性的大小，即数值越大该土壤对此污染物的微生物群落诱导耐性越大。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述数据分析软件为Excel,SPSS或SAS。