[发明专利]幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗检测设备领域，特别涉及一种幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置及其制备方法，可实现幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG的灵敏、特异、快速检测。

背景技术

幽门螺杆菌(Hp)感染在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等消化道疾病致病中起重要作用。感染幽门螺杆菌后，多数人症状较轻或无症状，不加治疗和延缓治疗的病情会严重，因此研究Hp感染在早期检测具有重要意义。根据抗体产生规律，血清IgM在幽门螺杆菌感染后2～4周出现，然后IgG在6～8周出现。IgM一般在2～6个月后完全消失。IgG通常缓慢减少。因此检测IgM抗体有助于对疾病早期诊断。传统幽门螺杆菌尿素酶抗体检测方法只能检测针对幽门螺杆菌尿素酶抗体，不能对抗体进行分类。

流行病学调查证明，我国成人幽门螺杆菌感染率在50％以上。在幽门螺杆菌感染的检测中，细菌培养、组织病理学检查、尿素酶试验、呼气试验等方法或因为给患者造成的侵入性痛苦，或需要一定的条件和技术，或因为需要特殊仪器，或因为费用昂贵等，其临床推广及多次重复追踪复查受到限制。而血清学检测因其非侵入性、快速、准确，可同时处理大量标本，检测不同类型的抗体，在临床检验、基础研究中倍受青睐。20世纪80年代兴起的胶体金免疫层析检测，操作简单快捷、结果清晰易于判断、无需复杂的实验技能和特殊设备，具有广泛应用前景。

胶体金免疫层析技术(goldimmunochromatographyassay，GICA)是一种将胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的固相膜免疫分析技术。胶体金免疫层析技术是一种常用的免疫层析检测方法，由于其操作简单、省时、制造成本较低、结果易判读等特点，非常适合于现场检测，广泛用于生物、医药、食品等领域。由于胶体金免疫层析技术是一步完成检测，因此检测过程的干扰因素较多，其灵敏度低是限制胶体金免疫层析应用范围的主要因素，传统的胶体金免疫层析技术的检测限高于ELISA等方法。

在胶体金免疫层析检测中，蛋白质固着于硝酸纤维素膜(NC膜)作为待测样本的捕获试剂。由于检测结果完全取决于捕获试剂在膜上达到良好的吸附效果，因此蛋白质在膜上均一、良好的吸附对胶体金检测结果非常重要。如果NC膜上结合的蛋白量不足或者蛋白结合力不够强，就会出现相当多的问题，在检测结果的检测线上非常明显。如果膜上结合的蛋白量太低，那么在结果中检测线显色较弱而且检测灵敏度降低。如果蛋白不能牢固的吸附于NC膜，那么在蛋白吸附于NC膜以前发生扩散，从而导致检测线较宽、显色较弱而不是鲜艳而清晰，使检测结果难以解释。在极端条件下，如果蛋白与NC膜的物理吸附作用太弱，流过的蛋白检测物和表面活性剂溶液可能将固着的蛋白从NC膜上洗掉，从而显示较宽或者根本不清晰的检测线，难以解释检测结果。

发明内容

本发明提供一种幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置及其制备方法，以解决现有技术存在的NC膜吸附蛋白量不足、结合力不强的问题。

本发明采取的技术方案是：

幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置，样品垫1、免疫胶体金玻璃纤维膜2、硝酸纤维素膜3、吸收垫4分别粘贴在塑料板5，所述硝酸纤维素膜3的两端分别与吸收垫4、免疫胶体金玻璃纤维膜2搭接，所述免疫胶体金玻璃纤维膜2的另一端与样品垫1搭接，所述硝酸纤维素膜3上设置第一检测线T1、第二检测线T2和质控线C，当所述的第一检测线T1上固相有纯化的高特异性抗人IgM抗体时，所述的第二检测线T2上固相有纯化的高特异性抗人IgG抗体；当所述的第一检测线T1固相有纯化的高特异性抗人IgG抗体时，所述的第二检测线T2上则固相有纯化的高特异性抗人IgM抗体；所述的质控线C上喷点抗幽门螺杆菌尿素酶抗体。

所述的第一检测线T1距离硝酸纤维素膜3的上缘3～12mm，所述的第二检测线T2距离硝酸纤维素膜3的上缘5～15mm，所述的质控线C距离硝酸纤维素膜3的上缘10～18mm。

本发明提供一种幽门螺杆菌尿素酶抗体IgM、IgG联合快速检测装置的制备方法，包括如下步骤：

(a)采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

(b)采用步骤(a)中制得的胶体金标记幽门螺杆菌尿素酶B抗原，获得免疫胶体金；

(c)采用喷金缓冲液稀释步骤(b)的免疫胶体金获得免疫胶体金溶液，用免疫胶体金溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金玻璃纤维膜；