[发明专利]一种琼花离体培养和快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物繁殖方法，具体为一种琼花离体培养和快速繁殖的方法。

背景技术

琼花(Viburnummacrocephalumf.keteleeri)，为五福花科(原忍冬科)荚蒾属半常绿灌木，花型奇特，果实鲜红，树形优美，有极高的观赏价值，是扬州市市花和我国特有的木本植物。琼花适应性强、生长健壮，管理较粗放，花果繁盛。因其耐荫可作为乔、灌、草结合的林下灌木；其果实成熟后色彩红艳，营养成分极为丰富，可作为诱鸟树种；奇异的花型、洁白的花色、浓郁的芳香，可作为优良的观赏树种。既适宜庭园绿化、美化、香化，也可作切花材料，各具特色。因此，琼花是满足城市植物群落和城市生态系统稳定性、景观多样性等多种需求的理想植物材料之一。

然而，琼花在自然条件下，存在生殖障碍，种子休眠严重，不易萌发，人工大田扦插成活率极低，自然和人工繁殖都极其困难，导致目前绿化苗木市场琼花种源稀缺，价格昂贵，限制了琼花在各地的普及。

琼花传统繁殖方法可分为分株、扦插、播种繁殖，但分株只有在成年大苗基部萌蘖时才能进行，且3～4年分一次，繁殖系数很低；扦插繁殖时生根较困难，成活率低，须借助全光雾苗床和激素处理；播种繁殖因其种子萌发具有双重休眠现象，即需1～2年层积沙藏才能发芽，发芽周期长，且播种的实生苗童期较长，6～8年才开花，不利于大规模快繁应用。快速繁殖成为制约琼花应用的瓶颈问题，为此，建立高效的琼花离体培养和快速繁殖技术有重要的实用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种操作简单、实用的琼花离体培养和快速繁殖的方法。

实现本发明的技术方案是：

(1)繁殖材料的选择

选取琼花成年植株上腋芽作为繁殖材料。

(2)繁殖材料的消毒

取剪好的材料，自来水流水冲洗2h后，用毛刷、洗衣粉将表面清洗干净，用70％(体积浓度)的酒精表面消毒30s，0.1％(质量浓度)吐温浸泡振荡冲洗20～30min，0.3％(质量浓度)次氯酸钠消毒液消毒15min，最后用无菌水冲洗5～7遍。

(3)培养基配制、灭菌

培养基配制：

琼花茎尖启动培养最佳初始培养基为：MS+BA1.0+ZT8.0+NAA0.2；

(配置一升的茎尖启动培养基——MS(培养基)：Ⅰ50ml，Ⅱ5ml，Ⅲ5ml，Ⅳ5ml；BA(6-苄氨基嘌呤)：10ml；ZT(玉米素)：80ml；NAA(萘乙酸)：2ml；定容至1L)琼花丛生芽分化培养的最佳培养基是：MS+BA1.0+ZT15；

(配置一升的丛生芽分化培养基——MS(培养基)：Ⅰ50ml，Ⅱ5ml，Ⅲ5ml，Ⅳ5ml；BA(6-苄氨基嘌呤)：10ml；ZT(玉米素)：150ml；定容至1L)

琼花叶片愈伤组织最佳培养基为：MS+BA0.5+NAA2.0+2,4-D0.5～1.0；

(配置一升的叶片愈伤组织培养基——MS(培养基)：Ⅰ50ml，Ⅱ5ml，Ⅲ5ml，Ⅳ5ml；BA(6-苄氨基嘌呤)：5ml；NAA(萘乙酸)：20ml；2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)：5～10ml；定容至1L)

琼花试管苗生根诱导最佳培养基为：MS+NAA8.0；

(配置一升的根诱导培养基——MS(培养基)：Ⅰ50ml，Ⅱ5ml，Ⅲ5ml，Ⅳ5ml；NAA(萘乙酸)：80ml；定容至1L)

每种培养基加20g/L蔗糖，琼脂粉6.8g/L，pH6.0～6.2，121℃高温高压灭菌18min，培养基温度25℃±2℃，光照12h/d，光照度约2000lx。

(4)接种、培养，包括琼花试管苗的培育、试管苗叶片愈伤组织培养和生根培养；

将腋芽种到启动培养基MS上，在接种过程中，琼花外植体的切口处一般都会迅速褐变，从而污染培养基，通过将外植体浸入无菌水进行切取，在启动培养基中增加0.5％Vc，增加转接培养基的次数可以大大减少褐变污染。

经过40d生长后，将丛生芽苗剪成带节小苗，转接入丛生芽分化培养的培养基进行继代增殖培养。

在琼花芽继代培养过程中，将多余的叶片剪成1cm×0.5cm左右长方块，接种于琼花叶片愈伤组织培养基。

待愈伤组织分化成芽，移入生根培养基进行生根诱导。

(5)驯化移栽

将达到移栽标准的生根试管苗移入温室，打开瓶口炼苗2～3d，取出洗净培养基，移栽在装有腐殖质土+硅石(体积比2:1)的基质中，前2～3周每天喷水3～4次，之后适量浇水，培养50～60d即可移栽入大田。