[发明专利]降解生活污水的复合微生物筛选方法

权利要求书

1.一种降解生活污水的复合微生物筛选方法，其特征在于：将待筛选的复合微生物接种到城市生活污水中进行为期5d的生物处理，利用电子鼻对生物处理前后的生活污水中的TVOC和恶臭类成分分别进行分析，以TVOC和恶臭类物质的降低及含量的减少程度作为筛选高效降解生活污水优势复合菌株的指标，以确定出最终的高效降解生活污水的复合微生物。

2.根据权利要求1所述的降解生活污水的复合微生物筛选方法，其特征在于：基于电子鼻的复合微生物筛选方法的具体步骤如下：

(1)菌种活化：各菌种分别活化，将其分别划线于相应固体培养基上；

(2)种子液制备：挑取活化的菌落，分别接种于各自对应的液体培养基中进行培养；

(3)用Bioscreen

全自动生长曲线测定仪对各菌种进行生长曲线的测定，确定菌体生长到对数期的时间，作为制备复合微生物菌液时种子液的培养时期。

(4)将培养至对数期的种子液按照分别接种到生活污水中，随后在摇床上以20℃、110rpm的条件进行为期5天的净化处理。

(5)利用电子鼻对用复合微生物菌液处理前后的污水中的VOCs和恶臭进行分析，将经复合微生物处理前和处理后后的污水分别放入60℃的恒温水浴摇床中加热1h使得顶空的气体与液体达到平衡；将气体经过传感器的流速设置为150ml/min，注射时间为60s；即可得到处理前和处理后的检测结果数据，将数据经过降维处理与PCA分析后进行对比分析。

3.根据权利要求2所述的降解生活污水的复合微生物筛选方法，其特征在于：分别选取保存的酵母菌、细菌和乳酸菌作为筛选的出发菌种，具体步骤如下：

(1)菌种活化：将4℃斜面保存的多种酵母菌、细菌和乳酸菌分别活化，将其分别划线于相应固体培养基上，酵母菌于30℃培养2-3d，细菌于37℃培养1d，乳酸菌37℃培养2-3d；

(2)种子液制备：挑取活化的菌落，分别接种于各自液体培养基中，酵母菌于30℃、180rpm培养2d，细菌和乳酸菌于37℃、200rpm培养2d；

种子培养基组成为：

酵母菌培养基为YEPD培养基，该培养基中各组分浓度为：蛋白胨2g/L，酵母膏1g/L，葡萄糖2g/L，PH6.0，121℃灭菌20min；

细菌培养基为肉汤培养基，该培养基中各组分浓度为：蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，NaCl5g/L,PH7.2-7.4,121℃灭菌20min；

乳酸菌培养基为MRS培养基，该培养基中各组分浓度为：蛋白胨10g/L，牛肉粉5g/L，酵母粉4g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO42g/L,无水乙酸钠5g/L，柠檬酸二铵2g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.05g/L，另外，加入土温801.0ml，PH6.2-6.4，121℃灭菌15min；

(3)用Bioscreen

全自动生长曲线测定仪对各酵母菌、细菌和乳酸菌进行生长曲线的测定，确定菌体生长到对数期的时间，作为制备复合微生物菌液时种子液的培养时期。

(4)将培养至对数期的种子液按照分别接种到生活污水中，随后在摇床上以20℃、110rpm的条件进行为期5天的净化处理。

(5)利用电子鼻对用复合微生物菌液处理前后的污水中的VOCs和恶臭进行分析，将经复合微生物处理前和处理后后的污水分别放入60℃的恒温水浴摇床中加热1h使得顶空的气体与液体达到平衡；将气体经过传感器的流速设置为150ml/min，注射时间为60s；即可得到处理前和处理后的检测结果数据，将数据经过降维处理与PCA分析后进行对比分析。

4.根据权利要求3所述的降解生活污水的复合微生物筛选方法，其特征在于：接种到生活污水中的复合微生物菌液为以下六种，各复合菌种中的不同菌种按质量比进行配比，其中酵母菌CGMCCNO.2.2076：酵母菌CGMCCNO.2.1554＝1:1；蜡样芽孢杆菌CGMCCNO.1.234：荧光假单胞杆菌＝1:1；酵母菌CGMCCNO.2.2076：荧光假单胞杆菌：嗜酸乳杆菌CGMCCNO.1.2912＝1:1:1；酵母菌CGMCCNO.2.2076:蜡样芽孢杆菌CGMCCNO.1.234:嗜酸乳杆菌＝1:1:1；酵母菌CGMCCNO.2.1554:荧光假单胞杆菌：嗜酸乳杆菌CGMCCNO.1.2912＝1:1:1；酵母菌CGMCCNO.2.1554：蜡样芽孢杆菌CGMCCNO.1.234：嗜酸乳杆菌CGMCCNO.1.2912＝1:1:1，其中荧光假单胞杆菌购买自天津科技大学生物工程学院微生物菌种保藏库，其余菌种均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。