[发明专利]一种NT-proBNP核酸适配体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于NT-proBNP检测技术领域，特别涉及一种NT-proBNP核酸适配体及其应用。

背景技术

脑钠肽(BNP)最早由Sudoh等在猪脑中发现，是一种由32氨基酸肽链组成的多肽类神经激素。人类心脏初始分泌的BNP是一种由132个氨基酸组成的前体，其后被酶切降解为具有生物活性的BNP(32个氨基酸残基组成)及脑钠肽前体N末端(NT-ProBNP，76个氨基酸残基组成)。BNP和NT-ProBNP主要由心肌壁受压后心室应答释放，是对心功能敏感且特异的标志物，其在血液中的浓度与心功能障碍的严重程度相关，可以用来更客观的评价患者疾病的严重程度和患者的预后。广泛应用于心衰诊断、心衰预后与监视的评估、急性冠脉综合症的危险分类、早期或轻度的心功能不全等。

NT-ProBNP较BNP在评价心功能上更具有优势，其优势在于：1、NT-proBNP由76个氨基酸组成，较BNP半衰期长，其半衰期大于1h，在血液中清除较慢，可累积较高浓度，更能灵敏地反映心功能的状态和变化，尤其是在早期诊断中；标本可以存放，即可以中心实验室检测，也可以床边检测，BNP只能床边即刻检测；2、由于无生理活性，因而不受治疗用合成BNP的干扰；3、NT-proBNP可以使用血清和血浆，抗干扰性强，BNP只能使用血浆标本。4、NT-proBNP的定量结果能提供可靠，且具有良好的重复性临床信息，更适合临床应用。因此，目前临床应用中已逐渐呈现将NT-proBNP取代BNP的趋势。

目前NT-proBNP检测方法主要为免疫检测方法，一种为竞争酶联免疫分析，如BiomedicaGruppe公司的产品；一种为双抗体夹心法，如RocheDiagnostics的双抗体夹心化学发光法，已申报发明专利。目前，基于抗体的方法，有一定优势，但也有一些固有的缺陷。现在，科学家不约而同的把注意力聚焦到分子生物学新技术在生物检测的应用上。

SELEX技术(系统进化指数富集技术)是90年代初研制的一种新的组合化学技术。其基本原理就是利用分子生物学技术，构建人工合成的单链随机寡核苷酸文库，其中随机序列一般长度在20-40bp左右，文库容量在10¹⁴-10¹⁵之间。由于单链随机寡核苷酸片段特别是RNA易形成发卡、口袋、假节、G-四联体等二级结构，故能与蛋白质、小肽，甚至金属离子结合，形成具有很强结合力的复合物。这种方法具有简便、快速、经济等特点，与其他组合化学库如随机肽库、抗体库和噬菌体表面展示文库相比，从寡核苷酸文库中筛选出的核酸适体具有许多优势：a.本身是寡核苷酸，分子量较小可以化学合成，节约成本；b.具有比抗体更高的特异性和相近的亲和性；c.便于标记，在不同部位有选择性的标记；d.稳定性好，重复性好，易于保存，对高温和剧烈条件不敏感。因此，寡核苷酸适配体在临床检测及诊断中具有良好的应用前景。有关核酸适配体检测新技术已广泛应用生物检测、生物传感、体内成像、蛋白核酸功能研究各个领域，显示出了诱人的前景。

NT-proBNP为76氨基酸残基的多肽，分子量小，可利用的抗原表位局限，且被罗氏专利保护，核酸适配体分子量只有10-20KD，较抗体IgG150kD小得多，在建立夹心法的检测中，可以获得多个抗原位点的特异核酸适配体，可以克服抗体分子量大而引起空间位阻的影响，易于夹心检测方法的建立。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，其目的在于提供一种NT-proBNP核酸适配体及其应用。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下；

一种NT-proBNP核酸适配体，所述的核酸适配体为SEQID：1-15所示的核苷酸序列中的任意一条。

所述的核酸适配体能与NT-proBNP蛋白或NT-proBNP蛋白N端氨基酸序列制备的单克隆抗体相结合。

所述的NT-proBNP蛋白N端的氨基酸序列为GlySerAlaSerAspLeuGluThrSerGlyLeuGlnGluGlnArg。

一种NT-proBNP核酸适配体在制备NT-proBNP检测试剂盒中的应用。

所述的NT-proBNP核酸适配体被生物素标记。

一种NT-proBNP核酸适配体在制备NT-proBNP检测试纸条中的应用。

所述的NT-proBNP核酸适配体被胶体金标记。