[发明专利]一种脂质体包封体积的测定方法

说明书

本发明涉及脂质体包封体积的测定方法，涉及药物制造领域中脂质体制剂的包封体积的测定。本发明在脂质体制备过程中加入离子溶液，根据离子组成选择荧光探针，将荧光探针加入脂质体溶液中，根据荧光强度计算脂质体外的离子总量T1；破坏脂质体膜使脂质体内所有离子释放，利用荧光探针的荧光强度可以测得脂质体膜破坏后溶液中离子总量T2；按公式P_IN(％)＝(T2‑T1)/T2计算脂质体的包封体积。与现有技术相比，本发明测定方法简便、无需分离、透析、凝胶过滤等复杂操作，耗时短，能够实现脂质体包封体积的快速测定，该方法测定结果准确性高，设备简单，适用范围广，可以用于脂质体产品检测与制备工艺优化，为脂质体包封水溶性药物的实际应用起到关键作用。

技术领域

本发明涉及一种脂质体包封体积的测定方法，具体涉及药物制造领域中脂质体制剂的包封体积的测定。

背景技术

脂质体药物已经成为当前药物剂型改造的重要方向，因其具有良好的生物相容性，以及可改变被包封药物体内分布和提高药物治疗指数而备受关注，利用脂质体进行剂型改造不仅可以提高药物的溶解性、利用效率、降低药物不良反应，还能进行靶向给药，有效将药物输送到病灶位置专一性地杀伤肿瘤或病灶细胞，同时避免全身用药对身体造成的损伤。

包封体积是指脂质体内包裹水相的体积占溶液总体积的百分比，当脂质体包封水溶性药物时，包封体积影响载药量及药物在体内的释放速度、生物分布、药物代谢动力学特征等，是脂质体药物药效评价的重要指标，也是评价与改造脂质体药物制造工艺的重要依据。目前，包封体积的测定方法主要有：溶质包封法、电子自旋共振法、电导率法、核磁共振法等。溶质包封法是将膜非渗透性标记物加入水化介质，使标记物进入脂质体内，通过测定内外水相标记物信号强度及脂质浓度得包封体积，但非渗透性标记物会存在于整个测定过程中，影响测定结果；电子自旋共振法，需要分离脂质体与外水相探针或对展宽剂溶液的渗透压及pH有严格要求，因此适用范围窄；电导率法要求选择标记物必须是电中性、膜不渗透性且不干扰电导率测定的物质；核磁共振法，温度对结果影响较大，温度越高，膜渗透性增加，内外水相水德扩散系数逐渐接近，使测定的包封体积值减小；同时上述测定方法有的需要特殊的仪器设备、有的需要进行脂质体与脂质体外溶液的有效分离，因此，现有方法存在步骤复杂、限制性强、成本高等缺陷，缺少直接测量脂质体包封体积的快速测定方法。

发明内容

本发明为解决现有技术中脂质体包封体积测定方法复杂、限制性强的问题，提供了一种脂质体包封体积的快速测定方法，该测定方法不需要进行离心、透析、凝胶过滤等复杂操作，直接将特异性荧光探针加入到脂质体溶液中快速测定脂质体包封体积。用荧光探针代替荧光染料，利用荧光探针的高灵敏性与可开关控制的特性实现脂质体包封体积的快速测定。

为解决脂质体包封体积的快速测定问题，本发明的技术构思是:利用一种不能透过脂质体的水溶性探针进行脂质体包封体积的测定。根据脂质体与包裹药物特点选择适宜的离子及其特异性水溶性荧光探针，将离子与脂质体制备过程中的水相混合，这样离子将在脂质体制备后分散到脂质体内外两侧。取一定量的脂质体溶液，加入荧光探针，由于荧光探针不能透过脂质体，只能存在于脂质体外部，所以荧光探针只检测脂质体外部的离子。通过测定荧光强度，根据荧光标准曲线与线性回归方程，可以计算出脂质体外的离子总数。利用表面活性剂破坏脂质体膜，使脂质体包封的离子释放，再加入荧光探针，测定荧光强度，根据荧光标准曲线与与线性回归方程，可以计算出脂质体膜破坏后的离子总量，进而可以通过公式计算脂质体的包封体积。

本发明的技术要点是：一种脂质体包封体积的测定方法，在脂质体制备过程中加入离子溶液，根据离子组成选择荧光探针，将荧光探针加入到脂质体溶液中，根据荧光强度计算出脂质体外的离子总量T1；破坏脂质体膜使脂质体内所有离子释放，利用荧光探针的荧光强度可以测得脂质体膜破坏后溶液中离子总量T2；按公式(1)计算脂质体的包封体积：

脂质体的包封体积百分数P_IN(％)＝(T2-T1)/T2 (1)。