[发明专利]一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法。属于动物用生物制品领域。

背景技术

口蹄疫在许多发展中国家仍然肆虐，引起猪牛羊等主要家畜发病，造成巨大的经济损失。 发达国家通过扑杀为主的防控措施有效控制了口蹄疫，对于流行地区和国家主要采取免疫结 合扑杀的综合防控措施，其中疫苗免疫是关键一环，疫苗质量是重中之重。检验口蹄疫灭活 疫苗质量控制的主要指标有内毒素含量，总蛋白含量，有效抗原含量(146S含量)，在我国 已有内毒素含量及总蛋白含量的检测标准。

有效抗原含量(146S)被认为是一个比较能够客观反映疫苗质量的重要指标，当前146S 含量检测可通过蔗糖密度梯度离心法及高效液相色谱法测定，但无法区分多价疫苗(不同血 清型口蹄疫毒株)，因此需研究能反映不同血清型146S含量的检测方法，可通过建立抗原ELISA 或使用标准动物免疫检测146S含量。

效力检验的目的是检测疫苗的免疫效果，其实质主要反映的是146S含量的高低。效力检 验需要使用本动物猪或牛，我国有6家口蹄疫灭活疫苗生产企业，每家企业每年生产几十批 至百余批疫苗，每批疫苗效力检验使用动物数18～50头不等，每年总共使用猪和牛数以万计。 由于在我国口蹄疫是强制免疫动物疫病，口蹄疫阴性动物极少，造成效力检验动物极度缺乏； 同时口蹄疫免疫攻毒还存在生物安全风险，可能造成散毒引起疫病暴发；动物之间个体差异 大，对结果影响明显，不能客观的反应疫苗中有效抗原含量；此外要处理大量的动物尸体会 造成环境污染；动物实验引发动物福利问题，总之，使用本动物免疫攻毒效力检验方法存在 诸多缺点，耗费大量人力财力。因此，口蹄疫灭活疫苗效力替代方法的研究迫在眉睫，国际 上阿根廷建立了牛免疫血清抗体水平与免疫攻毒保护之间的相互关系，替代了本动物攻毒检 验，并获得了OIE的认可。

综合目前口蹄疫灭活疫苗146S含量检测及效力检验存在的问题，进行了相应的研究，并 发明了一种替代本动物免疫攻毒的效力检验方法。

发明内容

本发明的目的是针对口蹄疫灭活疫苗效力检验存在的缺点，本发明提供了一种口蹄疫灭 活疫苗效力检验方法，使用该方法可对口蹄疫灭活疫苗进行效力检验，反映口蹄疫灭活疫苗 的免疫效果，本法用于替代口蹄疫灭活疫苗传统效力检验方法。

本发明的技术方案

1.一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，其特征在于本发明所述的方法是通过口蹄疫阻断 ELISA方法检测血清特异性抗体替代本动物免疫攻毒进行口蹄疫灭活疫苗效力检验。

2.如权利要求1所述口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，其特征在于该方法包括：(1)每批 疫苗每个剂量免疫4～8只Balb/c系小鼠，疫苗免疫剂量可分为1头份，1/2头份，1/4头份 三个剂量组，第28天采血，分离血清；(2)通过口蹄疫阻断ELISA方法检测血清特异性抗体， 抗体阻断ELISA效价-log₁₀X高于2.0以上，变异系数低于12％，即判为合格。

3.根据权利要求2所述的一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，步骤(1)中Balb/c系小 鼠为8-9周龄。

4.根据权利要求1所述的口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，步骤(1)中疫苗可为O型、 亚洲I型、A型单价疫苗或二价疫苗或三价疫苗。

5.根据权利要求1所述的一种一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，步骤(2)中血清特 异性抗体分为O型，Asia1型，A型。

具体实施方式

1.不同146S含量口蹄疫O型灭活抗原与小鼠免疫血清抗体关系

将已知146S含量(64μg/ml)的O型口蹄疫灭活抗原(金宇保灵生物药品有限公司提供) 作2倍系列稀释至0.25μg/ml，加入等体积206佐剂(中牧实业股份有限公司兰州生物药厂提 供)配制疫苗(疫苗抗原含量--32μg/ml)，每只Balb/c皮下注射免疫0.5ml，每个抗原含量疫 苗注射5只小鼠，28天采血分离血清，用液相ELISA试剂盒测定血清效价。血清效价用-log10X 表示，计算平均值和标准差，结果如图1所示。