[发明专利]一种芒果茎段的培养方法

说明书

【技术领域】

本发明属于植物组织培养领域，涉及一种芒果茎段的培养方法。

【技术背景】

芒果(mangiferaindica)属于漆树科(anacardiaceae)芒果属(meagifera)，是热带 优质水果之一，是世界第二大热带水果。芒果肉质细嫩，风味浓郁，营养丰富，具有十二种 必需氨基酸，维生素A和C、胡萝卜素等含量较高。食用芒果具有抗癌、美化肌肤、防止高血 压、动脉硬化、防止便秘、止咳、清肠胃的功效，是消费者非常喜爱的热带亚热带著名水果， 素有“热带果王”之美誉。中国是仅次于印度的第二大芒果生产国，芒果栽培地区主要分布 于海南、广西、广东、云南和四川的金沙江干热河谷区域，广西百色市则以盛产芒果而闻名， 具有很高的经济价值和社会价值。在芒果组织培养中，伤口容易发生褐化作用，给芒果组培 造成很大的困难。

【发明内容】

鉴于以上内容，本发明提供一种芒果茎段的培养方法，该方法能够防止芒果茎段在培养 过程中伤口褐化而提高培养成功率。

本发明所采用的技术方案是：一种芒果茎段的培养方法，包括以下步骤：1)沙床催芽； 2)预处理；3)灭菌；4)接种；5)白炽光照培养；6)获取无菌芽。

进一步地，在步骤1)中，选取健康的芒果核，洗净剖开去壳，将芒果胚埋在洗净的沙 床中催芽，隔天浇水，保持沙床湿润。

进一步地，在步骤2)中，待芒果胚长出的苗高至15cm，剪取芒果苗的顶端向下5cm， 剪去叶片，留0.5cm的叶柄，枝条剪成1.5cm长带一个腋芽的茎段和顶芽作为外植体，将外 植体用5g/L多菌灵溶液浸泡10min，再用流水冲洗10min。。

进一步地，将步骤2)中的外植体放置在灭过菌的超净工作台上，用0.1％HgCl₂灭菌10min， 无菌水冲洗5次后，转入无菌的0.1g/LVC溶液浸泡5min。

进一步地，将经步骤3)灭菌后的外植体接种到诱导培养基，该诱导培养基为WPM培养 基。

进一步地，在步骤4)中，将经步骤3)灭菌后的外植体接种到诱导培养基，该诱导培养 基为WPM培养基。

进一步地，在步骤5)中，将步骤4)接种后的外植体放置在白炽光照环境下培养3天， 光照时间为10-11h。

进一步地，在步骤6)中，将经步骤5)得到的外植体转接到新的培养基中继续培养30-40 天，得再生无菌芽；该新的培养基是以WPM培养基为基础，添加人工激素浓度为1.0mg/L6-BA 和0.1mg/LNAA，同时添加40mg/L苯甲酸钠。

相对现有技术，本发明的有益效果是：打破传统的以体细胞胚发生途径获得芒果再生无 菌芽，同时能够防止芒果茎段在培养过程中伤口褐化而提高培养成功率。

【具体实施方式】

以下实施例对本发明作进一步说明。

一种芒果茎段的培养方法，所述方法包括以下步骤：

1)沙床催芽：选取健康的芒果核，洗净剖开去壳，将芒果胚埋在洗净的沙床中催芽，隔 天浇水，保持沙床湿润；

2)预处理：待芒果胚长出的苗高至15cm，剪取芒果苗的顶端向下5cm，剪去叶片，留0.5cm 的叶柄，枝条剪成1.5cm长带一个腋芽的茎段和顶芽作为外植体，将外植体用5g/L多菌灵溶 液浸泡10min，再用流水冲洗10min，冲洗完成后备用；

3)灭菌：将步骤2)中的外植体放置在灭过菌的超净工作台上，用0.1％HgCl2灭菌10min， 无菌水冲洗5次后，转入无菌的0.1g/LVC溶液浸泡5min后备用；

4)接种：在步骤4)中，将经步骤3)灭菌后的外植体接种到诱导培养基，该诱导培养基 为WPM培养基；

5)白炽光照培养：将步骤4)接种后的外植体放置在白炽光照环境下培养3天，光照时 间为10-11h；

6)获取无菌芽：将经步骤5)得到的外植体转接到新的培养基中继续培养30-40天，得 再生无菌芽，该新的培养基是以WPM培养基为基础，添加人工激素浓度为1.0mg/L6-BA和 0.1mg/LNAA，同时添加40mg/L苯甲酸钠。

上述芒果茎段的培养方法打破传统的以体细胞胚发生途径获得芒果再生无菌芽，克服了 现有芒果茎段在培养过程中伤口褐化而造成培养率低的情况。