[发明专利]一种检测复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞的药效的方法

权利要求书

1.一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

1)、配置不同浓度的复方依山红提取物溶液；

2)、将HepG2.2.15细胞接种到RPM1-1640培养基中培养形成细胞悬浮液；

3)、依次将步骤1)中所述的不同浓度复方依山红提取物溶液分别加入到所述细胞悬浮液中，其中设有不加复方依山红提取物溶液的细胞悬浮液作为对照；

4)、将步骤3)中加入了不同浓度复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液a后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液b，最后测试所述溶液b的吸光值A及测试所述上清液a的吸光值A₁；将步骤3)中不加复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液c后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液d，测试所述溶液d的吸光值A₂及测试所述上清液c的吸光值A₃；

5)、通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A₁，所述溶液d的吸光值A2及所述上清液c的吸光值A3来计算HepG2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效，其中所述HepG2.2.15细胞的存活率＝(A/A₂)×100％，不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率＝(A₁/A₃)×100％。

2.根据权利要求1所述检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于：所述配置不同浓度的复方依山红提取物溶液为：取复方依山红提取物，溶于无菌去离子水，制成浓度为0.00032mg/L、0.0016mg/L、0.08mg/L、0.04mg/L、0.2mg/L、1mg/L的复方依山红提取物溶液。

3.根据权利要求1或2所述检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于，所述复方依山红提取物制备方法：复方依山红由重量份的壮药材满山红20、毛鸡骨草20、牛大力10、田基黄10、黄根5组成，分别取4份所述复方依山红，每份65g，将所述4份复方依山红分别用95wt％乙醇、60wt％乙醇、30wt％乙醇、水作为提取溶剂，每种溶剂回流提取三次，合并提取液，减压干燥后分别得四种复方依山红提取物。

4.根据权利要求1所述检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于，所述RPM11640培养基含有遗传霉素浓度为360-400mg/L、胎牛血清的重量百分比为8-12％、谷氨酰胺的浓度为1-3mmol/L、青链霉的重量百分比为0.5-2％和NaHC0₃的重量百分比为2-8％，所述RPM11640培养基的PH值为7.4-7.6。

5.根据权利要求1所述检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于，步骤2)中所述形成细胞悬液后计算细胞总数，活细胞数量不少于细胞总数的90％，所述HepG2.2.15细胞浓度为0.5×10⁵个/mL-1.5×10⁵个/mL。

6.根据权利要求1所述检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，其特征在于，采用自动酶标仪在吸收波长为515nm条件下测试所述溶液b的吸光值A及所述溶液d的吸光值A₂，在吸收波长为450nm条件下测试所述上清液a的吸光值A₁及所述上清液c的吸光值A₃。