[发明专利]一种副鸡禽杆菌菌液的培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及发酵培养领域，更具体地说涉及一种副鸡禽杆菌菌液的培养方法。

背景技术

培养基是提供微生物生长繁殖和合成各种代谢产物所需要的、按一定比例配制的多种营养物质的混合物，为获得高品质、高浓度的生物制品，必须要有营养丰富完备、组成合理、质量稳定，能充分发挥生产菌种合成代谢产物的能力。

副鸡禽杆菌的生命特性比较脆弱，是一类酶系统不完全的革兰氏阴性杆菌，生长不仅需要丰富的碳源和氮源，还需要健康动物血清、酵母浸出液及辅酶等特殊营养物质，而且培养条件苛刻，给菌液的发酵培养带来困难，目前副鸡禽杆菌的扩大培养所获得活菌数不高，且培养周期长。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种副鸡禽杆菌菌液的培养方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种副鸡禽杆菌菌液的培养方法，包括以下步骤：(1)一级种子液的制备；(2)二级种子液的制备；(3)微生物发酵罐扩大培养；其特征在于，所述的二级种子液为副鸡禽杆菌WF株或YC株二级种子液，所述的扩大培养后各菌株活菌数均≥4.5×10⁹CFU/mL。

进一步地，所述的扩大培养中副鸡禽杆菌二级种子液接入量为5％(V/V)。

进一步地，所述的扩大培养所用培养基为半合成培养基。

进一步地，所述的半合成培养基的pH值为7.2～7.6。

进一步地，所述的扩大培养为通气培养，通气量为5～6L/分钟。

进一步地，所述的扩大培养条件为搅拌速度100～200转/分，培养温度为37℃，培养时间为16-18h。

本发明的有益效果在于：该培养工艺所获得菌株活菌数高，且生产周期短，对疫苗的产业化生产工艺有很大的提高和改善。

具体实施方式

下面详细说明本发明的具体实施，有必要在此指出的是，以下实施只是用于本发明的进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域技术熟练人员根据上述本发明内容对本发明做出的一些非本质的改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。

菌种：副鸡禽杆菌WF株和YC株，由山东华宏生物工程有限公司提供。

培养基：半合成培养基，由山东华宏生物工程有限公司实验室自制。

发酵罐：40L微生物发酵罐，购自上海高机生物工程有限公司。

实施例1二级种子液的制备

将副鸡禽杆菌WF株或YC株的一级种子划线接种于鸡肉汤琼脂平板，在含5％～10％CO₂的条件下，37℃培养16～18h,选荧光性强的典型菌落接种于鸡肉汤培养基中，置37℃培养16～20h，经纯检合格后，即为二级种子，在2～8℃保存，不得超过6～8h。

实施例2二级种子接种量对制苗菌液浓度的影响

半合成培养基中，分别按1％、2％、3％、5％的接种量(V/V)接种副鸡禽杆菌WF株或YC株的二级种子液，37℃培养20h，分别对不同时间段的菌液进行活菌计数，比较二级种子不同接种量对制苗菌液浓度的影响。

不同二级种子接种量对副鸡禽杆菌WF株或YC株菌液培养浓度有一定影响，详细结果见表1和表2。

表1不同二级种子接种量对WF株菌液浓度的影响

表2不同二级种子接种量对YC株菌液浓度的影响

由表1和表2可知，在培养基中接种5％含量的二级种子，可以在较短时间内获得较好的培养效果，生产周期和生产工艺考虑，选择5％接种量为适宜接种量，培养时间为16-18h。

实施例3不同培养方式对制苗菌液浓度的影响

分别以静置培养及通气培养方式，测定不同菌液培养方式对菌液浓度的影响。通气培养时开始小量通气，逐渐增大通气量，通气量控制在5～6L/分钟，37℃条件下培养18h，分别对12h、16h和18h的时间点取样进行活菌计数，比较不同菌液培养方式对菌液浓度的影响。

静置培养与通气培养对WF株或YC株培养菌液活菌计数存在较大影响，详细结果见表3。

表3静置培养与通气培养的培养菌液活菌计数结果(×10⁹CFU/mL)

副鸡禽杆菌在培养增殖过程中，产生的代谢产物富集，抑制菌体的生长增殖，通气培养在培养过程中不断输入新鲜空气，调整培养基的营养成分、均匀度及pH值，因此对副鸡禽杆菌进行通气培养的优点是明显的。

实施例4微生物发酵罐扩大培养条件的优化