[发明专利]陆地棉转化事件LF-ICR22及其特异性鉴定方法

说明书

本发明公开了陆地棉转化事件LF‑ICR22及其特异性鉴定方法。本发明在陆地棉CCRI24中过表达GhKCS6基因，得到转基因棉花LF‑ICR22，其为将序列表中序列1所示的外源DNA分子插入陆地棉CCRI24基因组第A09号染色体的第65694545‑65696799位间，替换掉第A09号染色体的第65694545‑65696799位间2253bp的碱基序列得到的棉花。通过试验证明：转基因棉花LF‑ICR22不仅纤维的长度、马克隆值、比强度和整齐度高于受体材料，而且株高、叶片长度、叶片宽度、叶柄长度、叶柄宽度、果枝数等也均高于受体材料，为培育具有优良纤维品质的转基因棉花的研究奠定基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及陆地棉转化事件LF-ICR22及其特异性鉴定方法。

背景技术

转化事件是由外源基因在基因组插入位点的上下游侧翼区和外源基因构成的分子结构。通常，外源基因转化植物可以得到一个转化体群体，这个转化体群体包含大量独立的事件，其中每个事件都是独特的。外源基因在植物中的表达受到外源基因所插入的染色体位置的影响。这可能源自染色质结构或者整合位点附近转录调控元件的影响。相同基因在不同转化事件中的表达水平具有很大的差异，在表达的空间或时间模式上也可能存在差异。而且外源基因的插入也可能会影响内源基因的表达。因此，每个独立转化事件对受体植物的影响都是不同的。获得能有效表达外源基因，同时不影响植株本身农艺性状的植物转化事件在培育转基因作物新品种中具有重要的应用价值。

棉花作为重要的经济作物，是纺织工业的重要原料，是国防工业重要的战略物质，在国民经济中发挥着作用。棉花纤维细胞是自然界中天然存在的最长的细胞，是研究细胞伸长调控机制的最佳材料；陆地棉是栽培最为广泛的栽培种，目前全球棉花产量的95％源于陆地棉，伴随着劳动力成本的提高，棉花机械化采摘是未来发展得必然趋势。长度与比强度都在30以上的优质纤维棉花是生产上所必须的，但由于我国引进陆地棉的时间不足100年，长纤维陆地棉资源材料相对匮乏，导致传统的育种方法很难在短期内产生适合生产上应用的改良的纤维品质的棉花。

前人研究表明棉纤维发育可分成四个重叠的时期分别为：纤维发育的起始期(开花前1天至开花后2-3天)、纤维伸长期(开花后3天至25天)、次生壁加厚期(开花后15天至45天)及成熟期(开花后45天至50天)。开花后15天是纤维的快速伸长期，纤维伸长速率最快可达到2mm/天。纤维的长度是纤维品质的重要指标，纤维发育的机制研究为纤维品质的改良奠定了基础。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种转基因棉花的培育方法。

本发明转基因棉花的培育方法为将外源DNA片段插入目的棉花基因组第A09号染色体的第65694545-65696799位间，替换掉第A09号染色体的第65694545-65696799位间2253bp的碱基序列，得到转基因棉花；

所述转基因棉花的纤维品质高于所述目的棉花；

所述外源DNA片段为含有GhKCS6基因的DNA分子。

上述方法中，

所述外源DNA片段的核苷酸序列为序列表中序列1；

所述外源DNA片段在所述转基因棉花的上游侧翼片段为所述目的棉花基因组第A09号染色体的自第65694545位核苷酸起向其上游方向延伸得到的长度为0至5Kb的任意一个DNA片段；

所述外源DNA片段在所述转基因棉花的下游侧翼片段为所述目的棉花基因组第A09号染色体的自第65696799位核苷酸起向其下游方向延伸得到的长度为0至5Kb的任意一个DNA片段。

上述方法中，

所述上游侧翼片段为序列表中序列2所示的核苷酸；

所述下游侧翼片段为序列表中序列3所示的核苷酸；