[发明专利]检测ALDH2基因多态性的引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.检测ALDH2基因多态性的引物和探针，其特征在于，探针为公用的Taqman探针，其核苷酸序列5’端标记报告基团，3’端标记淬灭基团；引物的核苷酸序列如下：

突变型ARMS上游引物：SEQIDNO:1；

野生型ARMS上游引物：SEQIDNO:2；

公用的下游引物：SEQIDNO:3。

2.根据权利要求1所述的检测ALDH2基因多态性的引物和探针，其特征在于，探针的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，5’端标记的报告基团为FAM，3’端标记的淬灭基团为MGB。

3.一种检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的检测ALDH2基因多态性的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于，还包括内控引物和内控Taqman探针，核苷酸序列如下：

内控上游引物：SEQIDNO:5；

内控下游引物：SEQIDNO:6；

内控Taqman探针：SEQIDNO:7；

内控Taqman探针的核苷酸序列5’端标记报告基团，3’端标记淬灭基团。

5.根据权利要求4所述的检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于，内控Taqman探针的核苷酸序列标记的报告基团为JOE，淬灭基团为BHQ1。

6.根据权利要求4所述的检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于，还包括阳性质控品，阳性质控品为含有ALDH2G1510A野生型基因序列、G1510A突变型基因序列以及内控基因序列的DNA混合物，内控基因序列如SEQIDNO:8所示。

7.根据权利要求6所述的检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于，试剂盒中的试剂分为四类：

(1)ALDH2基因突变型检测液：至少含有SEQIDNO:1、SEQIDNO:3的引物和核苷酸序列为SEQIDNO:4的探针，以及内控引物和内控Taqman探针，dNTPs，PCR缓冲液；

(2)ALDH2基因野生型检测液：至少含有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的引物和核苷酸序列为SEQIDNO:4的探针，以及内控引物和内控Taqman探针，dNTPs，PCR缓冲液；

(3)阳性质控品；

(4)DNA聚合酶。

8.根据权利要求6所述的检测ALDH2基因多态性的试剂盒，其特征在于，试剂盒中的试剂分为三类：

(1)ALDH2基因突变型检测液：至少含有SEQIDNO:1、SEQIDNO:3的引物和核苷酸序列为SEQIDNO:4的探针，以及内控引物和内控Taqman探针，dNTPs，PCR缓冲液，ABI公司的产品FastmasterPremix；

(2)ALDH2基因野生型检测液：至少含有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3的引物和核苷酸序列为SEQIDNO:4的探针，以及内控引物和内控Taqman探针，dNTPs，PCR缓冲液，ABI公司的产品FastmasterPremix；

(3)阳性质控品。

9.权利要求6～8任一所述的检测ALDH2基因多态性的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括：

(1)用内控引物及内控Taqman探针扩增阳性对照品，结果显示JOE信号CT值小于25，表示试剂盒可用；

(2)将待检样品DNA分别用突变型引物和公用Taqman探针，以及野生型引物和公用Taqman探针进行荧光定量PCR反应并获得对应的突变型CT值和野生型CT值，△Ct＝|野生型CT值-突变型CT值|≤2.5为杂合型样本，△Ct＝野生型CT值-突变型CT值>2.5为突变型样本，△Ct＝突变型CT值-野生型CT值>2.5为野生型样本。

10.根据权利要求9所述的检测ALDH2基因多态性的试剂盒的使用方法，其特征在于，荧光定量PCR反应条件为：

第一阶段：95℃4min；

第二阶段：95℃5s，58℃30s，10个循环；

第二阶段：95℃30s，58℃30s，72℃30s，35个循环；

信号收集：第三阶段72℃时收集FAM和JOE信号。