[发明专利]一种真核细胞模型的制备方法

说明书

一种真核细胞模型的制备方法，涉及一种细胞模型的制备方法。本发明是要解决现有的细胞模型仅模拟了原核细胞，不满足于生命进化的研究的问题。方法：一、制备单室磷脂泡囊；二、制备人造真核细胞模型；三、PCR扩增；四、人造细胞分裂。本发明制备出结构完整，大小均一，其中的小泡囊尺寸与人体细胞核尺寸相近的人造真核细胞，并且在人造的细胞核中成功的进行了PCR技术和人造细胞的分裂过程，实现了人造细胞核的功能化。本发明用于制备真核细胞模型。

技术领域

本发明涉及一种细胞模型的制备方法。

背景技术

探索生命的起源，研究生物的进化，构建一种结构、形状和性能的模式化，更利于明确细胞间的相互作用以及机能与结构和形态间的相互关系。这正是建立细胞模型的意义所在。

目前利用脂质体建立细胞模型仅模拟了原核细胞，然而原核细胞是组成原核生物的细胞，这类细胞不具有以核膜为界的细胞核，只有拟核，进化地位较低。真核细胞是从一种原核细胞通过自然选择和突变，逐渐的进化而来的。为了研究生命的进化过程，建立真核细胞模型具有十分重要的意义。

发明内容

本发明是要解决现有的细胞模型仅模拟了原核细胞，不满足于生命进化的研究的问题，提供一种真核细胞模型的制备方法。

本发明真核细胞模型的制备方法是按照以下步骤进行的：

一、制备单室磷脂泡囊：将二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和胆固醇加入到氯仿中，得到磷脂溶液，将两片ITO玻璃电极表面分别涂覆5～7μL的磷脂溶液，待氯仿蒸干，得到两片表面覆有磷脂溶液的ITO玻璃电极；

将聚四氟乙烯矩形框置于两片表面覆有磷脂溶液的ITO玻璃电极中间，得到电形成装置，利用真空脂将电形成装置密封，且聚四氟乙烯矩形框与两片表面覆有磷脂溶液的ITO玻璃电极形成中间空腔，中间空腔内填充PCR缓冲溶液，在两片表面覆有磷脂溶液的ITO玻璃电极上分别连接信号发生器，设定交流电压为3～5V，波形为正弦波，设定频率为10～12Hz，时间控制为1～4h，得到单室磷脂泡囊；

二、制备人造真核细胞模型：将PCR溶液与单室磷脂泡囊混合并静置30～35min，得到人造真核细胞溶液；静置时单室磷脂泡囊发生了向内凹陷的过程，维持30～35min目的就是让凹陷完全；即形成大泡囊内包含两个小泡囊的脂质体；

三、PCR扩增：将含有遗传物质的人造真核细胞溶液放置到PCR仪中，进行PCR扩增；PCR扩增后的脂质体在大泡囊内存在两个小泡囊，在小泡囊内部已含有遗传物质DNA；

四、人造细胞分裂：将PCR扩增产物与190mM的PCR缓冲溶液混合，在渗透压的作用下，大泡囊会各自携带两个小泡囊进行分裂，最终得到真核细胞模型。

步骤一中所述二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱与胆固醇的质量比为(7～4):(3～1)；

步骤一所述磷脂溶液中二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的浓度为3～5mg/mL

步骤一和步骤四中PCR缓冲溶液由200mM Tris-HCl、200mM KCl、100mM(NH₄)₂SO₄和20mM MgSO₄组成。

步骤二中所述的单室磷脂泡囊与PCR溶液的体积比为(1～1.5):1；

步骤二中所述PCR溶液的具体成分如下：

此表格中PCR缓冲溶液由200mM Tris-HCl、200mM KCl、100mM(NH₄)₂SO₄和20mMMgSO₄组成。

步骤二中所述PCR溶液中的DNA模板可以为任何大小的单链、双链、线性、环状的DNA。