[发明专利]阻断人程序性死亡因子1(PD-1)功能的单克隆抗体及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一种阻断人程序性死亡因子1(PD‑1)功能的单克隆抗体及其编码基因和应用。它包括重链和轻链，所述的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3的第20位至132位所示，所述的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4的第20位至130位所示。本发明新发现了一种能阻断人PD‑1功能的单克隆抗体43‑H‑8及其编码基因，该单克隆抗体43‑H‑8能够与人PD‑1抗原特异性结合，半数有效浓度EC50为1.0665nM，可以特异性阻断PD‑1/PD‑L抑制信号，因此可以将本发明的单克隆抗体43‑H‑8作为PD‑1通路的阻断剂，从而成为肿瘤免疫治疗、慢性病毒感染性疾病及自身免疫性疾病的治疗一种新药物。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及抗人PD-1单克隆抗体的制备及可变区序列及应用。

背景技术

程序性死亡因子1(programmed cell death 1，PD-1)是在活化T细胞和B细胞表面上表达的免疫抑制性受体(Yao，Zhu et al.Advances in targeting cell surfacesignalling molecules for immune modulation.Nat Rev Drug Discov，2013，12(2)：130-146)。最初发现时，因其结构类似于CD28分子，PD-1被认可是CD28超家族成员。然而PD-1蛋白因缺乏介导CD28/CTLA-4与B7.1/B7.2相结合的MYPPPY序列，以及介导ICOS与ICOS-L相结合的FDPPPF序列，因而在结构上与CD28、CTLA-4及ICOS存在明显差异。因此，PD-1与配体的结合非常特异，不与其他的B7家族分子产生交叉结合。

PD-1有两个配体：PD-L1和PD-L2。PD-L1又称B7H1或CD274，PD-L2称为B7DC或CD273。PD-1主要表达于CD4+T细胞、CD8+T细胞、NKT细胞、B细胞和活化的单核细胞表面，主要受T细胞受体(TCR)或B细胞受体(BCR)信号的诱导表达，TNF可增强PD-1在这些细胞表面的表达(Francisco，Sage et al.，The PD-1pathway in tolerance andautoimmunity.Immunol Rev，2010，236：219-242)。PD-L1和PD-L2表达于不同的细胞群体(Shimauchi，Kabashima et al.，Augmented expression of programmed death-lin bothneoplastic and non-neoplastic CD4+ T-cells in adult T-cell leukemia/lymphoma.Int J Cancer，2007，121(12)：2585-2590)，大量的研究表明，PD-L1与活化的T细胞上的PD-1相互作用可显著抑制效应性T细胞的生物学功能，PD-1、PD-L1或PD-L2的表达改变导致PD-1/PD-L抑制途径发生异常，进而机体发生免疫功能亢进/低下性疾病，PD-1基因敲除小鼠可引发多种自身免疫性疾病。