[发明专利]用于肝癌检测的标志物组合及检测试剂盒

说明书

本发明涉及用于肝癌检测的标志物或其组合，用于检测它们的试剂和试剂盒，以及它们在肝癌检测和将肝癌患者与乙肝患者、肝硬化患者和/或健康者相区分中的应用。

技术领域

本发明涉及用于肝癌检测的标志物或其组合，用于检测它们的试剂和试剂盒，以及它们在肝癌检测和将肝癌患者与乙肝患者、肝硬化患者和/或健康者相区分中的应用。

背景技术

原发性肝癌(PLC，简称肝癌)是临床上最常见的恶性肿瘤之一，起病隐匿，侵袭生长迅速，治疗后易复发，预后极差，被称为“癌中之王”。全世界半数左右的肝癌患者集中在中国，每年我国约有11万人死于肝癌，居恶性肿瘤死亡率的第二位。目前，手术切除及肝移植是肝癌最有效的治疗方法，但绝大多数肝癌患者就诊时已到中晚期，无法手术，手术切除率仅为10-30％。对于不能手术的病例，传统的放、化疗效果不佳，患者生存期一般不超过半年。由此可见肝癌早期诊断至关重要，是临床诊疗和预后的关键。

早期肝癌检出率低的现状反映出目前肝癌的诊断方法还有很大局限性。当前肝癌的诊断主要依靠血清学检查和影像学诊断。血清学检查主要检测血清中的肿瘤标志物，目前主要是依靠甲胎蛋白(AFP)的检测，但AFP在小肝癌中的敏感度仅为40％左右。由此可见，单独使用一种肿瘤标志物无法准确诊断肿瘤的发生和发展，联合检测多种肿瘤标志物才能提高检出的准确率，避免或减少漏诊和假阳性。应用新的检测技术、选择更有诊断价值的标志物组合，提高现有肿瘤标志物检测的灵敏度和特异性对肝癌早期诊断极为重要。目前，常用的肝癌标志物主要包括：甲胎蛋白(AFP)、α-L-岩藻糖甘酶(AFU)、肝细胞生长因子(HGF)、硫酸肝素蛋白多糖3(GPC3)、谷氨酰转移酶同工酶Ⅱ(GGTⅡ)等。

甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)：AFP是目前最常用的HCC诊断标志物，AFP是人体在胚胎时期血液中含有的一种特殊蛋白，正常成人血清中含量极微，肝细胞癌可显著升高。

α-L-岩藻糖甘酶(alpha-L-fucosidase，AFU)：1984年，Deugnier首先发现了HCC患者血清AFU活性明显升高，并报道了对正常人、肝硬化患者和继发转移肝癌患者血清AFU的测定结果，在原发性肝癌中它诊断敏感性为75％，特异性为90％，认为AFU可能成为诊断HCC的一项有用指标。

肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor，HGF)：HGF是一种能够刺激干细胞增殖的多肽生长因子。HGF受体(Met)主要分布于各脏器及其肿瘤组织的上皮细胞，在重症肝炎、肿瘤等疾病中，血清中的HGF水平可发生明显变化，有望成为HCC的诊断标志物。

硫酸肝素蛋白多糖3(glypican-3，GPC3)：GPC3位于细胞膜表面，是细胞表面多功能的共同受体。Hsu等应用差异显示技术首次发现了GPC3基因在HCC组织中有异常表达。GPC3现已成为肝穿刺标本良恶性肝疾患鉴定的重要参考标志物之一。

谷氨酰转移酶同工酶2(γ-glutamyltransferase isoenzyme2,GGT2)：GGT2被认为是AFP以外的最佳肝癌标志物。目前认为GGT2是肝细胞产生的癌胚蛋白，肝细胞产生的GGT糖链结构发生改变，这种差异可在肝癌前期和早期出现，因此具有较高的预测价值和早期诊断价值。

发明内容

本发明公开了一组肝癌血清学检测的标志物组合，包括甲胎蛋白(AFP)、α-L-岩藻糖甘酶(AFU)、肝细胞生长因子(HGF)、硫酸肝素蛋白多糖3(GPC3)、谷氨酰转移酶同工酶2(GGT2)，可将肝癌患者与乙肝患者、肝硬化患者或健康者进行有效区分。通过酶联免疫吸附法(ELISA)单独检测HGF或将HGF与其它四个标志物中的一个或多个联合检测，可大幅提高全期肝癌和早期肝癌血清学检测的敏感度和特异性，明显优于肝癌临床检测常用的AFP单指标。本发明为肝癌的血清学检测提供了一种可靠的方法，并提供了一种检测用试剂盒。