[发明专利]一种制备重组间充质干细胞的方法及其得到的重组间充质干细胞

说明书

本发明公开了一种制备重组间充质干细胞的方法及其得到的重组间充质干细胞。本发明的方法通过降低受体间充质干细胞中Mysm1基因的表达量，得到重组间充质干细胞C3‑shM细胞中Mysm1基因的表达量降低，细胞增殖迅速，分化能力增强，PGE2分泌能力增强，对于CD3+T细胞增殖抑制能力增强。本发明制备方法操作简单、方便实用，建立了快速获得大量间充质干细胞的方法，有望解决临床MSC量不够的问题。

技术领域

本发明涉及一种制备重组间充质干细胞的方法及其得到的重组间充质干细胞。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem cell,MSC)是最早从骨髓中分离的一种非造血干细胞。MSC可分化为成骨细胞、成脂肪细胞、成软骨细胞、神经元、肌肉细胞和肠上皮细胞等。MSC的多向分化特性使其成为理想的种子细胞用于衰老、病变引起的组织损伤修复及抑制免疫相关疾病。虽然MSC可从多种组织中分离获得，但在临床应用中存在的普遍问题是MSC纯度不够、数量不够且自我更新能力差等。

Mysm1是MYb-like,SWIRM and MPN domain-containing protein-1的缩写，又称为2A-DUB，或者KIAA1915/MYSM1，是组蛋白H2A去泛素化酶之一。Mysm1可以特异性的调节组蛋白H2A的单泛素化，从而改变组蛋白修饰，进而影响基因的转录。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何快速获得大量的间充质干细胞。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种重组间充质干细胞的制备方法。

本发明所提供的重组间充质干细胞的制备方法，包括如下步骤：降低受体间充质干细胞中Mysm1基因的表达量，得到重组间充质干细胞；所述受体间充质干细胞为离体的间充质干细胞；所述Mysm1为组蛋白H2A去泛素化酶。

本发明的重组间充质干细胞与所述受体间充质干细胞相比，所述Mysm1基因的表达量降低；所述Mysm1基因的表达量可以为Mysm1基因的mRNA水平。

上述方法中，所述Mysm1是氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的蛋白质。SEQ ID No.1由819个氨基酸组成。

上述方法中，所述Mysm1基因为编码SEQ ID No.1所示蛋白质的基因，其cDNA序列为SEQ ID No.2所示。

上述方法中，所述降低受体间充质干细胞中Mysm1基因的表达量包括向受体间充质干细胞中导入抑制所述受体间充质干细胞中所述Mysm1基因表达的物质。

上述方法中，所述抑制所述受体间充质干细胞中所述Mysm1基因表达的物质为下述1)-10)中任一种生物材料：

1)shRNA，是形成茎环结构的短发夹RNA；

2)表达1)所述的shRNA的表达载体；

3)表达1)所述的shRNA的重组微生物细胞；

4)表达1)所述的shRNA的重组动物细胞；

5)表达1)所述的shRNA的重组植物细胞；

6)1)所述shRNA产生的siRNA；

7)表达6)所述siRNA的表达载体；

8)表达6)所述siRNA的重组微生物细胞；

9)表达6)所述siRNA的重组动物细胞；

10)表达6)所述siRNA的重组植物细胞。

上述方法中，所述生物材料中，1)所述的shRNA的核苷酸序列是SEQ ID No.3。