[发明专利]金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素-1核酸适配体T-7及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素‑1核酸适配体T‑7及其制备方法和应用，核酸适配体T‑7的二级结构为茎环结构，其中茎多由G≡C配对组成，并连接大小不一的环，本发明采用核酸适配体的体外SELEX筛选技术，利用羧基磁珠作为固相介质，以TSST‑1为靶标，通过TSST‑1羧基磁珠从ssDNA文库中筛选得到中毒性休克毒素‑1适配体，该核酸适配体可以在制备金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素‑1的纯化和检测试剂中应用以及在研制治疗金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素‑1相关疾病的药物中应用，该核酸适配体能高亲和力、高特异性地与TSST‑1结合，可作为抑制TSST‑1活性的一种潜在的拮抗剂。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素-1核酸适配体T-7及其制备方法和应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌产生中毒性休克毒素-1(toxic shock syndrome toxin-1，TSST-1)引发中毒性休克综合征(toxic shock syndrome，TSS)。中毒性休克综合征因多器官受累，以发烧、低血压、剥脱性发疹、腹泻、呕吐为主要特征，最终导致休克和多脏器衰竭，病死率高而倍受重视。国内已报道流行性腮腺炎、鼻腔术后、严重烧伤后和输液伴发金葡菌的感染或TSST-1的污染而发生毒性休克综合征。

TSST-1是由噬菌体Ⅰ群金黄色葡萄球菌产生的外毒素，是一种多肽蛋白质，属于致热原性超抗原家族，具有很强的超抗原活性。TSST-1是一个由两个亚单位(A、B)紧密堆积而成的肾形分子，其A亚单位是毒素的活性中心，它决定毒素的致病性与作用方式，通过作用于细胞内的靶点而发挥细胞毒效应，B亚单位能与靶细胞上的特异性受体结合，它决定毒素对宿主细胞的选择亲合性。

TSST-1不经抗原提呈细胞处理，直接结合到细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)类分子抗原结合槽的外侧，这种结合是非限制性的，形成的复合物与T淋巴细胞抗原受体(TCR)的β链V区结合，激活T淋巴细胞使其活化、增殖，并释放大量的炎性细胞因子引起强烈的免疫应答，最终导致炎症失控和多器官的损害。

适配体(Aptamer)是一种经体外筛选技术得到的寡核苷酸序列(DNA或RNA)。对可结合的配体具有严格的识别能力和高度的亲和力，这是由于单链寡核苷酸的一些二级结构，如发夹、茎环、假节、凸环、G-四聚体等，可使核酸分子形成多种三维结构，成为适配体与靶物质特定区域结合的基础，并且两者主要通过“假碱基对”的堆积作用、氢键作用、静电作用和形状匹配等相互作用力产生高效特异的结合力。因此，一个适配体可以区分密切相关亚型或不同的相同的分子构象状态。寡核苷酸适配体是由体外生成的化学合成，使之化学改性或添加荧光染料来控制其稳定性，以用于实验室诊断或临床治疗。适配体突出特点在于其作用靶点广泛、无免疫原性、宿主适应性好、组织渗透性强，因此是一种很有发展前途的药物分子，可用于直接干扰疾病的发生发展过程。由于核酸适体与蛋白特异性结合后往往能抑制蛋白的功能，而且它缺乏免疫原性，体内渗透力强，因此是一种很有发展前途的药物分子，可用于直接干扰疾病的发生发展过程。通过适配子与TSST-1特异性结合，并对其进行结构分析、序列改造及修饰优化，达到适配体抑制TSST-1功能的目的，临床应用前景广阔。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高亲和力、高特异性的金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素-1核酸适配体T-7及其制备方法和应用。

本实用新型的目的通过如下技术方案实现：一种金黄色葡萄球菌中毒性休克毒素-1核酸适配体T-7，该核酸适配体T-7的序列如下所示：

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