[发明专利]多糖多酚植物基因组的提取方法

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，公开了一种多糖多酚植物基因组的提取方法，步骤为：取植物材料研磨后加入核酸分离缓冲液和2‑巯基乙醇，混匀后置水浴中；离心机中离心后弃上清；加入1×PBS溶液，研磨仪上震荡混匀，离心后弃上清；向沉淀中加入预热的3×CTAB裂解液并混匀，水浴裂解；加等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，混匀，离心；取上清，加入等体积氯仿/异戊醇混合液，混匀，离心；取上清，加入NaCl和冰异丙醇，混匀，沉淀1～3小时；取出离心后，将沉淀用乙醇洗涤，风干后加TE溶解，即完成提取。本发明能有效去除多糖多酚，减少糖和酚类物质对核酸提取的影响，提高DNA的质量和浓度。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种应用于植物基因组提取的方法。

背景技术

基因组DNA的提取技术是遗传学与分子生物学研究中的基本技术。DNA提取是分子分析的重要步骤，在得到基于凝胶系统的高分辨率结果方面起着重要作用，高质量的DNA是获得准确试验结果的基础。

现有多种DNA提取方法，如CTAB法、高盐低pH法、SDS法、苯酚法和提取试剂盒的使用等。但是，对于多数叶厚汁多、含有大量多糖类和其他次生代谢产物的植物来说，采用常规的方法很难提取出高质量的DNA，因而需要改良常规的分离方法。

CTAB是一种去污剂，可破碎细胞壁和细胞膜，并能与核酸形成复合物，在高盐溶液中是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度时，从溶液中沉淀，通过离心，可将CTAB--核酸复合物同蛋白质、部分多糖类物质分开。溶解于高盐溶液中的CTAB--核酸复合物，加入乙醇可使核酸沉淀，而CTAB则溶于乙醇。CTAB法是目前应用最广泛发展较成熟的方法，最大优点就是除去多糖。在CTAB法的基础上进行适当的改良，获得了高质量的DNA分子。细菌一般分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌和真菌的基因组提取一直困扰着科研人员。目前提取微生物基因组的方法主要有酶解法、化学或者热裂解法、磁珠或超声波机械破壁，又或者是上述几种方法的结合。但这些方法提取出的基因组浓度很低，且大多污染严重，不能满足三代测序的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种改进的多糖多酚植物DNA提取方法，从而对富含多糖多酚植物材料的基因组实现快速高效的获取。

为解决上述技术问题，本发明的实施方式提供了一种多糖多酚植物基因组的提取方法，包含下述步骤：(1)取待提取植物材料，研磨后加入核酸分离缓冲液和2-巯基乙醇，并使所述2-巯基乙醇的终浓度为1％～5％，震荡混匀后，置于75～95度水浴中5～30分钟；(2)从水浴中取出后，离心机中高速离心，弃掉上清液；(3)加入1×PBS溶液，研磨仪上震荡混匀，高速离心，弃上清；(4)向沉淀中加入500～1000ul预热3×CTAB裂解液并混匀，65度水浴裂解30～60分钟；(5)加等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，混匀，离心；(6)取上清，加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀，离心；(7)取上清，加入NaCl和冰异丙醇，上下颠倒混匀，在-20～-80度环境下沉淀1～3小时；(8)取出，离心后，将沉淀用乙醇洗涤，风干后加TE溶解，即得到所提取的基因组。

本发明的实施方式所提供的多糖多酚植物基因组的提取方法，其创新点在于：一方面，在核酸分离缓冲液中适当提高2-巯基乙醇的浓度，能有效的去除多酚以及代谢物质，能降低后续裂解多酚物质多提取的影响；另一方面，使用1xPBS缓冲液清洗并研磨分离后的细胞沉淀，能有效去除多糖，减少后续多糖对提取的影响；再一方面，增加CTAB的浓度至3％，能更有效的去除多糖。因而，本发明的实施方式所提供的多糖多酚植物基因组的提取方法，能有效去除多糖多酚，减少糖和酚类物质对核酸提取的影响，提高DNA的质量和浓度；且本发明的实施方式所提供的基因组提取方法耗时短，成本低廉，相较试剂盒，能节约成本，提高浓度，满足后续实验的需求。