[发明专利]一株高效表达[2Fe2S]铁氧还蛋白的重组大肠杆菌及其应用有效
| 申请号： | 201510829234.1 | 申请日： | 2015-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN105349480B | 公开（公告）日： | 2019-03-05 |
| 发明（设计）人： | 黄海燕;王书宁;胡烈杰;许晓群;王郡甫;栾俊文;苏庆红 | 申请（专利权）人： | 山东省医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P21/02;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250062 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高效 表达 fe2s 铁氧还 蛋白 重组 大肠杆菌 及其 应用 | ||
1.一株高效表达[2Fe2S]铁氧还蛋白的重组大肠杆菌发酵生产[2Fe2S]铁氧还蛋白的方法，步骤是：
(1)构建高效表达[2Fe2S]铁氧还蛋白的重组大肠杆菌，将重组大肠杆菌菌株以体积比1～5％的接种量接种到含有抗生素和铁硫源的TB培养基中，在37±1℃和180±10rpm转速条件下培养2～3小时至OD620nm为0.4～0.6，获得菌液；
其中，
上述重组大肠杆菌菌株的构建方法是将来源于巴斯德梭菌(Clostridiumpasteurianum)DSM 525的[2Fe2S]铁氧还蛋白基因连接入pETDuet-1载体，制得重组质粒命名为pETDuet-[2Fe2S]，并将制得的重组质粒转入含有pCodonPlus和pRKISC质粒的E.coliC41(DE3)中获得；该重组大肠杆菌命名大肠杆菌(Escherichia coli)pCodonPlus/pRKISC/pETDuet-[2Fe2S]Fd，其含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的[2Fe2S]铁氧还蛋白基因；
上述TB培养基的配方及组分终浓度是：Tryptone 12g/L，Yeast extract 24g/L，Glycerol 4ml/L，KH2PO4 2.3g/L，K2HPO4 12.5g/L；
上述抗生素分别是终浓度为25μg/ml的氯霉素，终浓度为10μg/ml的四环素，终浓度为100μg/ml的氨苄青霉素；
上述铁硫源配方及组分终浓度是：柠檬酸铁铵0.2-0.3g/L，L-半胱氨酸0.1-0.2g/L，柠檬酸铁0.18-0.3g/L，FeSO4·7H2O 0.25-0.4g/L；
(2)向制得的菌液中加入终浓度为0.5mM的IPTG，在35～37℃和180rpm转速下诱导10～24小时，收集培养液离心，获得含[2Fe2S]铁氧还蛋白的重组大肠杆菌细胞；
(3)破碎细胞，分离纯化制备[2Fe2S]铁氧还蛋白。
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