[发明专利]一种番木鳖碱的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然化合物提取技术领域，具体涉及一种番木鳖碱的提取方法。

背景技术

生物碱类化合物在中药动物药中分布广泛，其化学结构复杂多样，生物活性显著。一些结构新颖的生物碱具有引人注目的生理和药理活性，有可能是治疗一系列人类重大疾病药物的重要来源。番木鳖碱(又称士的宁)就是这样的一种生物碱类化合物，是广泛存在于植物体内的一种重要的天然活性成分，其结构如下：

目前发现番木鳖碱有如下作用：第一，其对增殖分化的细胞以及肿瘤细胞具有抑制其增殖分化和细胞毒性的作用，诱导细胞凋亡，因此，番木鳖碱抑制肿瘤的活性；第二，对消化系统的作用，用病人肠痿管直接测验证明，番木鳖碱对人体胃肠平滑肌没有兴奋作用，对消化道的唯一作用，是由于它的苦味，反射地增加胃的分泌；第三，对呼吸系统的影响：马钱子碱的作用为番木鳖碱的1/8，据报道它对氨水及SO2引起的小鼠与咳嗽，有较强的镇咳作用，口服较腹腔注射作用显著，另有袪痰作用(小白鼠酚红法)；第四，番木鳖碱有箭毒样作用，对某些细菌，在试管内有抑制作用，非洲产多种马钱属植物，其中有些也具有肌肉松弛作用；第五，种子中的生物碱番木鳖碱，口服后很快吸收而起作用，首先兴奋脊髓的反射机能，其次兴奋延髓中的呼吸中枢中枢及血管运动中枢，并提高大脑皮质感觉中枢(皮质分析器)的机能。

文献报道从马钱子中提取士的宁的经典方法如下：用石灰水浸泡马钱子，再以苯作溶剂提取并回收大部分苯后以盐酸萃取，萃取液析出士的宁粗结晶，重结晶获取高纯度的盐酸士的宁。缺点为溶剂价格高，环境污染大，安全性差(苯的毒性大)，而且对设备要求严格，需严防溶剂泄露。

公告号为CN101838273B的中国发明专利公开了一种从马钱子中提取士的宁的方法，依次通过水回流提取，添加高分子絮凝剂吸附澄清，调节pH析出沉淀A，硫酸或磷酸溶解沉淀A，再调节pH析出沉淀B，稀盐酸溶解沉淀B，结晶，重结晶得纯度最高达95.7的终产品。该方法步骤繁琐，且由于采用回流提取和结晶方法，重复性差，成功率不高，结果受实验条件和环境影响大。

公告号为CN104072505A的中国发明专利公开了一种同时提取马钱子碱和士的宁的方法，主要采用超声提取，大孔树脂吸附，硫酸乙醇反复结晶的方法得到盐酸士的宁，该方法得到的士的宁并非纯的士的宁，且方法本身也存在重复性差，体系稳定性差等问题。

所以，到目前为止，在天然产物提取物中提取番木鳖碱的方法总的来说比较繁琐，重复性差，可操作性不高，更不用说提取到高纯度或者单体番木鳖碱了，这在一定程度上也阻碍了番木鳖碱作为中药开发方面的进展。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术问题，提供一种从马钱子中提取番木鳖碱的方法，该方法采用二维高效液相色谱进行分离纯化，分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时，得到的番木鳖碱单体化合物纯度可以达到99％以上。

本发明所采用的技术方案为：

一种番木鳖碱的提取方法，该方法包括以下步骤：

(1)以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后，用乙醇浸泡或者回流提取，过滤，所得滤液进行旋转蒸发至干，用甲醇体积分数为50-70％的甲醇-水二元混合溶剂溶解，得到固含量为50-200mg/mL的提取液；

(2)对得到的提取液进行液相色谱分离：采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇；进样量为50-200mL/针；流动相流速为100-1000mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式为B相浓度25％等度洗脱10min、B相浓度35％等度洗脱20min、B相浓度100％等度洗脱10min；根据紫外吸收光谱收集其中7号峰(保留时间23-25min)作为目的组分，旋转蒸发至干，得到一维液相组分；

(3)用甲醇体积分数为50-70％的甲醇-水二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至固含量为50-100mg/mL；

(4)进行二维液相色谱分离：采用的色谱柱为C18色谱柱，采用的流动相为二元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇；进样量为500-2000μL/针；流动相流速为10-30mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式为B相浓度33％等度洗脱40-50min；根据紫外吸收光谱收集其中1号峰(保留时间18-20min)作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到目标产物番木鳖碱。

所述步骤(1)中回流提取可重复进行1-3次，每次1-2h。