[发明专利]一种制备低分子降压肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生化技术领域，具体地说是以大豆分离蛋白液为原料,利用复合酶法制备低分子降压肽,即同时运用三种水解酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)来水解大豆分离蛋白,再将水解液通过活性炭吸附、超滤等纯化方法从中获取较纯的低分子大豆降压肽。

背景技术

高血压是一种常见的心血管疾病，它发病率高，常伴有心脏、血管、肺以及肾脏等器官功能性或器质性改变，是引发心、脑、肾和眼血管等各种并发症和导致中风、促进动脉粥样硬化、冠心病的一个重要危险因子。高血压发病率在发达国家达到20%以上，世界各国的平均发病率为10%～20%，且人群分布广，包括老年人、中年人和儿童全世界每年因高血压死亡的人数达1200万。我国曾进行了三次全国性的高血压普查，1959年的发病率是5.11%,1979～1980年发病率为7.73%,1990～1991年发病率为11.26%。目前，我国现有高血压患者己超过1.2亿人口。因此，治疗和预防高血压病是当今社会十分重要的课题。

高血压一般有两种类型:原发性高血压和继发性的高血压，前者主要是由于周围小动脉血管口径变小或血液粘滞度增加，造成外用阻力过高所致;而血容量与心输出量的增高、血管的僵硬程度与血管的充盈程度均影响血压的变化;同时植物性神经系统对血压的调节作用也是一个重要因素。继发性的高血压，也叫症状性高血压，是在某些疾病过程中并发的血压升高，其成因主要有内分泌病、肾脏疾病、心脏功能异常等。

血管紧张素转化酶(angiotensinconvertingenzyme.,ACE)是一种含锌的二肽酶，能被氯离子激活并具有较宽的底物特异性。ACE广泛分布在哺乳动物的组织中。在肾素一血管紧张素系统(renin-angiotensinsystem,RAS)和激肽释放酶一激肽系统(ka11ikrein-kininsystem，KKS)中，ACE对机体血压和心血管功能起着重要的调节作用。抑制ACE的活性被认为是治疗高血压的一种重要而有效的方法。目前，大量高效、特异的ACE抑制剂在治疗高血压病和充血性心力衰竭中发挥着重要作用。

食物蛋白来源丰富，方便易得，用食物蛋白来生产活性肽成本较低、安全性高、适合大规模生产。来源于食品的降压肽只对高血压患者起到降压的作用，对血压正常者无降压作用，不会产生降压过度的问题;这些肽用食用级的酶在温和条件下制得的，其安全性极高，无毒副作用;除了有降压的功能外，还同时具有抗氧化、促消化、降血糖、抗血小板凝集、增强人体免疫力等作用;具有较高的热稳定性、水溶性等优点，可作为功能因子添加到饮料、食品中去，市场前景极好。

发明内容

本发明的目的是生产较纯的低分子大豆降压肽。

本发明的技术方案是：以大豆分离蛋白液为原料,利用复合酶法制备低分子降压肽,即同时运用三种水解酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)来水解大豆分离蛋白,再将水解液通过活性炭吸附、超滤等纯化方法从中获取较纯的低分子大豆降压肽。本发明具有工艺简单，操作安全，成本较低的特点，非常适用于规模化大生产。包括如下步骤：

(1)将底物浓度为4%～6%的大豆分离蛋白溶液在85℃水浴加热预处理15min～30min;

(2)待料液冷却到40℃～60℃后，先加入E/S为6%～8%的碱性蛋白酶,pH7.5～9.0条件下微波水浴加热10～20min;

(3)酶解后的料液中再加入E/S为8%～10%的中性蛋白酶，温度为50℃～60℃,pH7.5～9.0条件下酶解10～20min；

(4)最后再加入E/S为9%～11%的胰蛋白酶，温度为50℃～60℃,pH7.5～9.0条件下酶解15～30min；

(5)料液用4kDa～2kDa的超滤膜于40℃，0.lMPa～0.2MPa对料液超滤30min～50min；

(6)超滤透过液经沸水浴10～20min彻底灭酶处理后，再3000r～5000r／min离心10～30min，收集上清液，真空冷冻干燥，即三酶水解大豆多肽。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

以大豆分离蛋白液为原料,利用复合酶法制备低分子降压肽,即同时运用三种水解酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)来水解大豆分离蛋白,再将水解液通过活性炭吸附、超滤等纯化方法从中获取较纯的低分子大豆降压肽。包括如下步骤：

(1)将底物浓度为4%的大豆分离蛋白溶液在85℃水浴加热预处理20min;