[发明专利]一种快速鉴定腌渍绵蜇种属的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定腌渍绵蜇的方法，其特征在于，具体步骤为：

S1、将腌渍海蜇进行脱盐处理，6～18h换一次水，共换水3～8次，脱水后，将得到的海蜇贮存于终浓度为60～80v/v％乙醇溶液中，备存；

S2、取步骤S1备存的海蜇组织100～200mg，剪碎，5000～10000rpm离心5～20min，取离心沉淀用无尘纸吸尽水分后，采用DNA提取试剂盒提取海蜇基因组DNA；

S3、将步骤S2得到的基因组DNA采用16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增，产物于-20℃储存；

所述16S rRNA基因通用引物为16SF和16SR引物，所述16SF和16SR引物序列分别为：

16SF：5'-TCGACTGTTTACCAAAAACATAGC-3′，

16SR：5'-ACGGAATGAACTCAAATCATGTAAG-3′；

S4、步骤S3得到的PCR扩增产物分别采用HindⅢ、HpaⅠ、DraⅠ和XhoⅠ内切酶进行酶切处理，将得到的酶切产物用3w/v％琼脂糖凝胶电泳分离，成像检测，并将成像结果与已知绵蜇酶切产物的成像进行比对，进而实现快速鉴定腌渍绵蜇种属。

2.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法，其特征在于，步骤S1

所述腌渍海蜇脱盐处理方式为12h换一次水，换4次；

所述乙醇溶液终浓度为70v/v％。

3.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法，其特征在于，步骤S2所述海蜇组织提取量为150mg。

4.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法，其特征在于，步骤S2所述DNA提取试剂盒为深加工食品DNA提取试剂盒。

5.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法，其特征在于，步骤S3所述PCR扩增反应体系中：

每25μl反应体系，包括10×ExTaq Buffer 2.5μl，dNTP 2μl，ExTaq 0.125μl，16SF0.25μl，16SR 0.25μl，模板DNA 0.5μl，水19.375μl；

反应条件为94℃3min起始变性，94℃30s变性，60℃30s退火，72℃30s延伸，循环30次；72℃10min进行最终延伸。

6.根据权利要求1所述快速鉴定腌渍绵蜇的方法，其特征在于，步骤S4所述酶切处理，

每30μl反应体系中，包含4μl步骤S3得到的PCR扩增产物，2μl 10×酶切缓冲液，1μlHind Ⅲ、Hpa Ⅰ、Dra Ⅰ或Xho Ⅰ中的一种限制性内切酶，水余量；

反应条件为37℃反应1h。