[发明专利]一种鉴定三带喙库蚊的实时荧光PCR引物和探针及其应用在审
| 申请号： | 201510814889.1 | 申请日： | 2015-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN105331711A | 公开（公告）日： | 2016-02-17 |
| 发明（设计）人： | 王宇平;高博;张建庆;方义亮 | 申请（专利权）人： | 福建国际旅行卫生保健中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州智理专利代理有限公司 35208 | 代理人： | 王义星 |
| 地址： | 350001 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 三带喙库蚊 实时 荧光 pcr 引物 探针 及其 应用 | ||
1.一种用于海滨库蚊亚组中三带喙库蚊鉴定的荧光PCR引物和探针，其特征在于，所述引物包括上游引物Culex-F和下游引物Culex-R，上游引物Culex-F由SEQIDNO.1所示的序列，下游引物Culex-R由SEQIDNO.2所示的序列；所述探针为Tritaeniorhynchus-P探针，探针Tritaeniorhynchus-P由SEQIDNO.3所示的序列。
2.根据权利要求1所述的实时荧光PCR引物和探针，其特征在于，所述探针Tritaeniorhynchus-P的5’端标记有FAM，3’端标记有非荧光淬灭基团NFQ和MGB。
3.权利要求1所述三带喙库蚊实时荧光PCR引物和探针在鉴定三带喙库蚊方面的应用。
4.权利要求1所述三带喙库蚊实时荧光PCR引物和探针在制备三带喙库蚊鉴定试剂或试剂盒中的应用。
5.一种用于海滨库蚊亚组中三带喙库蚊鉴定的荧光PCR检测方法，其特征在于，PCR反应所用的引物和探针为权利要求1所述的引物和探针。
6.根据权利要求5所述的实时荧光PCR方法，其特征在于，PCR反应体系为：5μL模板DNA，10μmol/L上游引物Culex-F0.625μL，10μmol/L下游引物Culex-R0.5μL，10μ℃mol/L荧光探针Tritaeniorhynchus-P1.25μL，2×实时荧光PCR预混试剂和余量ddH2O，共25μL；
PCR反应程序为：预变性94℃2min；94℃5s，58℃45s，共40个循环；58℃收集荧光信号；根据扩增曲线、Ct值确定检测结果的阴性和阳性；
其中，实时荧光PCR预混试剂包含有实时荧光PCR反应所需要的DNA聚合酶、缓冲液和dNTP。
7.一种用于海滨库蚊亚组中三带喙库蚊鉴定的试剂盒，包括：权利要求1或2所述的上游引物Culex-F和下游引物Culex-R，以及Tritaeniorhynchus-P探针，实时荧光PCR反应体系中的DNA聚合酶、荧光PCR预混试剂，其中荧光PCR预混试剂包含有实时荧光PCR反应所需要的缓冲液和dNTP。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，单份25μL的实时荧光PCR反应体系使用的DNA聚合酶量为0.5~1U；单份25μL的实时荧光PCR反应体系中各dNTP的终浓度为0.2mmol/L。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于福建国际旅行卫生保健中心，未经福建国际旅行卫生保健中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510814889.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
