[发明专利]根部接种小麦光腥黑粉菌侵染小麦的方法

说明书

本发明提供了一种根部接种小麦光腥黑粉菌侵染小麦的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)培养小麦光腥黑粉菌菌丝：将浓度为1×10⁵/ml的小麦光腥黑粉菌冬孢子悬液涂布到2％的水琼脂培养基上，每9cm直径的培养皿加0.1－0.5ml悬液，16℃培养，经观察确认直至长出先菌丝，所述先菌丝为冬孢子直径的1/2时用于下一步接种；(2)接种：将发芽后的小麦种子放在上述长出菌丝的培养基上，培养皿放入5℃培养箱中边春化边侵染，持续30‑45天。(3)春化结束后，将麦苗种植在无菌土中，放到白天23摄氏度，夜晚21摄氏度的人工气候培养箱中培养；所述发芽后的小麦种子指胚芽鞘萌出不超过1mm的发芽小麦。采用该方法，可以获得仅根部感染而其它部位表现正常的小麦光腥黑粉菌的小麦植株。

技术领域

本发明属于农业微生物领域，具体涉及一种根部接种小麦光腥黑粉菌侵染小麦的方法。

背景技术

小麦光腥黑粉菌，又名小麦光腥黑穗病菌(拉丁名：Tilletia foetida)，为黑粉菌目、腥黑粉菌科、小麦光腥黑穗病菌属。它可引起小麦腥黑穗病。小麦光腥黑穗病菌冬孢子萌发时只生出一根原菌丝，而内壁发生多处消解。原菌丝含有多个细菌核，并有脂肪粒，核糖体，糖原和线粒体等。原菌丝顶端可形成8个担孢子，并桥接形成“H”型菌丝。其孢子生于子房内，外包果皮，与种子同大。其孢子呈球形至椭圆形，有时候为长圆形至多角形，淡灰褐色至榄褐色，平滑，有腥臭。

在对小麦光腥黑粉菌的生理生长情况和侵染机制的研究中，通常需要通过人工方法将它接种至小麦植株使后者感染得到染病小麦植株以进行观察和分析，并且，在仅针对小麦植株根部的研究中，可能只需要得到根部侵染而其它部位表现正常的小麦材料，但迄今为止，尚未存在一种有效的人工接种小麦光腥黑粉菌仅侵染小麦根部的方法，以获得根部侵染率较高而其它部位表现正常的小麦植株用于研究。

发明内容

本发明基于上述领域的空白，提供了一种获得用于后续研究的小麦光腥黑粉菌根部感染小麦的方法。

本发明的技术方案如下：

根部接种小麦光腥黑粉菌侵染小麦的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)培养小麦光腥黑粉菌菌丝：将浓度为1×10⁵/ml的小麦光腥黑粉菌冬孢子悬液涂布到2％的水琼脂培养基上，每9cm直径的培养皿加0.1－0.5ml悬液，16℃培养，经观察确认直至长出先菌丝，所述先菌丝为冬孢子直径的1/2时用于下一步接种；

(2)接种：将发芽后的小麦种子放在上述长出菌丝的培养基上，培养皿放入5℃培养箱中边春化边侵染，持续30-45天；

(3)春化结束后，将麦苗种植在无菌土中，放到白天23摄氏度，夜晚21摄氏度的人工气候培养箱中培养；

所述发芽后的小麦种子指胚芽鞘萌出不超过1mm的发芽小麦。

所述冬孢子悬液的制备方法如下：

将小麦光腥黑粉菌的菌瘿放进离心管中，加蒸馏水浸泡半个小时后将种皮夹出，150目纱网过滤去掉残渣，过滤液体离心震荡，将上清倒出弃掉；

对沉淀加水常温培养12-36小时后将水倒掉，加0.25％NaClO处理1min后倒掉NaClO溶液，加无菌水离心清洗反复2到3次，得到冬孢子悬液；调整浓度为1×10⁵/ml。

所述观察指，涂布24h后在显微镜下观察，每隔12h观察一次，直至观察到侵染菌丝。

步骤(2)中所述培养的时间为3d。

所的方法在研究小麦光腥黑粉菌方面的应用。

本发明提供了一种获得根部感染小麦光腥黑粉菌的小麦植株的方法，该方法获得的被侵染小麦植株仅在根部出现感染现象，而植株的其它部位表现正常。