[发明专利]一种基于原位生成硫化镉检测地塞米松光电化学传感器的制备方法

权利要求书

1.一种基于原位生成硫化镉检测地塞米松光电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）羧基化氮化碳纳米片的制备

在陶瓷坩埚中加入5g的三聚氰胺于马弗炉中500~600℃煅烧3~5h，冷却至室温，取0.5~2.0g的氮化碳加入50~200mL、2.5~10mol/L的硝酸水溶液中于120~130℃回流20~28h，冷却至室温后，回流产物用超纯水离心洗涤，30~40℃真空干燥10~14h；

（2）硫化铋纳米棒的制备

1.0~3.0g的硝酸铋溶解于10~50mL乙二醇中，通氮气15min，得溶液A，0.7~2.8g的硫化钠溶解于5~20mL乙二醇和10~40mL超纯水混合液中，均匀搅拌15min后，得溶液B，所得溶液B在磁力搅拌下逐滴加入溶液A中，得溶液C，再将1.0~3.0g尿素和5~20mL超纯水加入混合液C中搅拌15~60min，混合液转入反应釜中160~200℃下反应20~28h，降至室温后，抽真空过滤收集，然后依次用无水乙醇和超纯水各离心洗涤3次，真空60℃干燥；

（3）光电化学传感器的制备

1）将导电玻璃依次用洗洁精、丙酮、乙醇和超纯水超声清洗，氮气吹干；

2）分别取6μL、2~8mg/mL羧基化氮化碳溶液和6μL、2~8mg/mL硫化铋溶液依次滴加到ITO导电玻璃的导电面，室温下晾干，马弗炉中300~500℃煅烧15~60min，冷却至室温；

3）在修饰电极表面滴加质量分数为0.01%~0.1%的壳聚糖溶液，依次用0.01mol/L氢氧化钠溶液和超纯水冲洗电极表面，室温下自然晾干成膜；

4）滴加20μL、质量分数为2.5%~10%的戊二醛，超纯水清洗，室温下自然晾干；

5）滴加6μL、5~20μg/mL的地塞米松半抗原于修饰电极表面，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

6）滴加3μL、质量分数为1%~3%的牛血清白蛋白溶液，以此封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

7）滴加6μL、5pg/mL~50ng/mL地塞米松抗原和镉离子功能化二氧化钛抗体孵化物的混合溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中自然晾干，制得一种检测地塞米松的光电化学传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于原位生成硫化镉检测地塞米松光电化学传感器的制备方法，所述镉离子功能化二氧化钛抗体孵化物，其特征在于，制备步骤如下：

（1）0.01~0.04mol钛酸四丁酯溶解于15~60mL乙醇中，加入5~20mL水，磁力搅拌100~140min；

（2）将混合溶液转移至高压反应釜中，100~300℃温度下反应10~14h；

（3）所得产物用超纯水和乙醇各离心洗涤3次，80℃下真空干燥11~15h，制得多孔二氧化钛纳米颗粒；

（4）将制得的10~30mg二氧化钛加入至50mL、5~20mmol硝酸镉溶液中，超声2min，50℃水浴振荡1~4h，离心水洗；

（5）将7~20mg镉离子功能化的二氧化钛纳米颗粒分散在7.5mL、1~4mg/mL聚丙烯胺盐酸盐溶液中，搅拌1h；

（6）加入100~400μL、质量分数为1%~5%的戊二醛，震荡2h；

（7）将所得溶液离心洗涤，用pH7.0的PBS分散，加入100μL、50~200μg/mL地塞米松抗体震荡20h，离心洗去多余抗体，分散在2mL含质量分数为0.5%~2%BSA的pH7.0的PBS溶液里，于4℃冰箱中储存以备用。

3.如权利要求1所述的一种基于原位生成硫化镉检测地塞米松光电化学传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：

（1）在所制备的光电化学传感器电极表面，滴加6μL、0.1~0.7mol/L的硫化钠溶液，放置30~50min；

（2）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，制备的ITO修饰电极为工作电极，在10mL、pH6.0~8.0的PBS，0.05~0.2mol/L的抗坏血酸缓冲溶液中进行测试；

（3）用时间-电流法对地塞米松标准溶液进行检测，设置电压为-0.1~0.1V，运行时间100s，光源波长为405~450nm；

（4）背景电流趋于稳定后，每隔20s开灯持续照射10s，记录光电流，绘制工作曲线；

（5）将待测的地塞米松样品溶液代替地塞米松标准溶液进行检测。