[发明专利]一种新型开菲尔发酵剂的制备方法及应用

权利要求书

1.一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于其原料包括：

制备微囊的原料：10⁸~10¹⁰cfu/mL的菌液；

混合溶液（其中含有质量浓度为0.2~0.6%黄原胶与质量浓度为3~7%氯化钙）和质量浓 度为0.4~0.8%的海藻酸钠溶液用于制备微囊，体积比为1:1~3；

质量浓度为0.1~0.4%的壳聚糖溶液用于固化微囊，微囊与壳聚糖溶液体积比为1：2~5；

利用对数后期的酵母菌、乳酸菌和醋酸菌分别制成的微囊按质量混合比例为：(2~6): (7~14):(1~4)。

2.根据权利要求1所述的一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于菌株为马克思克鲁维酵 母CICC1953；开菲尔乳杆菌CICC20260；肠膜明串珠菌CICC23516；巴氏醋杆菌罗旺亚种 CICC7011。

3.根据权利要求2所述的一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于其中酵母菌是 Kluyveromycesmarxianus，乳酸菌是Lactobacilluskefiri和Leuconostoc mesenteroides，醋酸菌是醋酸菌Acetobacterlovaniensis。

4.根据权利要求2所述的一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于酵母菌，利用PDA培养基 （马铃薯200g/L，葡萄糖20.0g/L，水1000mL，121℃灭菌20min），30℃，120r/min进行扩增，通 过测定菌液的OD值来确定酵母菌的生长曲线，取对数期的菌液，4℃，8000r/min离心15min， 收集菌体备用。

5.根据权利要求2所述的一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于乳酸菌，利用MRS培养基 （蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母粉5g/L，柠檬酸二铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，乙酸钠 5g/L，硫酸锰0.05g/L，七水硫酸镁0.58g/L，葡萄糖20g/L，加水至1000mL，pH6.0-6.5, 121℃灭菌20min），35℃，120r/min进行扩增，通过测定菌液的OD值来确定醋酸菌的生长曲 线，取对数期的菌液，4℃，8000r/min离心15min，收集菌体备用。

6.根据权利要求2所述的一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于醋酸菌，利用LB培养基 （氯化钠10g/L，蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min），30℃， 120r/min进行扩增，通过测定菌液的OD值来确定醋酸菌的生长曲线，取对数期的菌液，4℃， 8000r/min离心15min，收集菌体备用。

7.根据权利要求2所述的一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于酵母菌、乳酸菌和醋酸 菌，分别制成10⁸~10¹⁰cfu/mL的菌液，然后取1mL菌液与19mL的黄原胶和氯化钙溶液混合均 匀，利用注射装置将混合菌液匀速滴入到海藻酸钠溶液中，形成液芯微胶囊；过滤并用无菌 水冲洗表面的海藻酸钠，然后放入3~7%的氯化钙溶液中固化处理20~50min，滤出冲洗，放入 到0.1~0.4%的壳聚糖溶液中处理20~50min，滤出冲洗备用。

8.根据权利要求2所述的一种新型开菲尔发酵剂，其特征在于按照质量比酵母菌微胶 囊：乳酸菌微胶囊：醋酸菌微胶囊=(2~6):(7~14):(1~4)。