[发明专利]用于肿瘤过继性免疫的高增殖力、高杀伤力NK细胞在审
| 申请号： | 201510809118.3 | 申请日： | 2015-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN105219713A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 崔长友 | 申请（专利权）人： | 崔长友 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所 43205 | 代理人： | 许伯严 |
| 地址： | 210046 江苏省南京市栖霞区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 肿瘤 过继 免疫 增殖 杀伤力 nk 细胞 | ||
1.一种体外扩增NK细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将浓度为0.01～3.0mg/ml的抗人CD3单克隆抗体、0.01～3.0mg/ml的抗人CD16单克隆抗体包被在细胞培养瓶中，包被条件为室温，孵育时间为0.5～6h；
(2)将从外周血中分离获得的单个核细胞用无血清培养液接种在上述的细胞培养瓶中，刺激12～24h；
(3)加入NK细胞培养用无血清培养液和浓度为20～50ng/ml的IL-2、浓度为20～50ng/ml的IL-15以及浓度为30～80ng/ml的SepulturinA，刺激12～84h，然后转入细胞培养袋中继续培养；
(4)收获NK细胞。
2.根据权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：所述孵育时间为1h。
3.根据权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：包被在细胞培养瓶中的抗人CD3单克隆抗体浓度为0.15mg/ml。
4.根据权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：包被在细胞培养瓶中的抗人CD16单克隆抗体浓度为0.15mg/ml。
5.根据权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：将从外周血中分离获得的单个核细胞用无血清培养液接种在包被有抗人CD3和抗人CD16单克隆抗体的细胞培养瓶中刺激16h。
6.根据权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：所述IL-2浓度为35ng/ml。
7.根据权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：所述IL-15浓度为35ng/ml。
8.根据权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于：所述SepulturinA浓度为55ng/ml。
9.权利要求1-8任一所述的体外扩增NK细胞的方法制备的NK细胞。
10.权利要求9所述NK细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
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