[发明专利]一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质

说明书

本发明公开了一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质，其具体经保存液的配制、基质预处理、混悬液的配制、标准物质的制备及菌种鉴定、均匀性验证、定值、稳定性检验，制得含菌数为530±24 CFU/瓶的成品。所得含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质具有良好的均匀性，可解决现有标准物质中鸡肉基质难溶于水的问题，且其品质稳定、质量可控，适用于微生物高效、准确的定量检测。

技术领域

本发明属于食品微生物技术领域，具体涉及一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质。

背景技术

菌种标准物质是生物特性标准物质中较为特殊的一类，通过使用菌种标准物质能够有效保证微生物定量检测高效、准确地运行，但目前国内仅在出入境检验检疫系统内少数几个局在研制，大部分的标准物质都是靠国外引进。2006年，辽宁出入境检验检疫局所研制的食品中微生物菌落总数标准物质被批准为国家二级标准物质。该标准物质包含两种研制方法：一种是以模拟食品实物，添加肠杆菌、沙雷氏菌、芽孢杆菌等具有标准号、可溯源性的菌株经冷冻干燥制成的：另一种是以鱼粉为基质与上述细菌混合经冷冻干燥制成的，而我国在食品基质的食源性致病微生物标准物质领域仍是空白，因此研制添加基质的微生物定量标准物质有重要意义。

志贺氏菌（Shigella）是一类具有高度传染性的肠道致病菌，其广泛存在于各种食品中。人类对志贺氏菌的易感性较高，所以在食物和饮用水的卫生检验时，常以志贺氏菌作为指标菌。本发明以志贺氏菌为目标菌，通过添加无菌鸡肉粉，配合冻干保护剂，经冷冻干燥、不确定度评估以及对特性值进行均匀性检测和稳定性追踪，得到含一定菌数的志贺氏菌标准物质，并形成了一套食品基质的食源性致病微生物标准物质的制备工艺。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质，其具有良好的均匀性，且品质稳定、质量可控，适用于微生物高效、准确的定量检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种含鸡肉基质的志贺氏菌标准物质，其制备方法包括以下步骤：

1）保存液的配制：将志贺氏菌标准菌株冻干粉用志贺氏菌增菌肉汤溶解后，划线接种于志贺氏菌显色培养基上，36±1℃下培养20h-48h；然后挑取单菌落接种于志贺氏菌增菌肉汤中，41.5±1 ℃下培养16h-20h；吸取菌液于无菌离心管中，加入其体积1.5倍、质量浓度为40%的无菌甘油，混合，制成保存液；保存液于-20℃存储备用，使用前恢复至室温（22℃）后涡旋10s；

2）基质预处理：将鸡肉剔除脂肪组织后，冷冻干燥至脱水率为75%，然后将脱水鸡肉粉碎至组织细度为170目，采用⁶⁰Coγ辐射灭菌后分装备用；

3）混悬液的配制：按1g鸡肉基质加入7mL无菌水的比例，将预处理后的鸡肉基质与水混合成基质悬液，再加入其3倍体积的保护剂，混合制得混悬液；

4）标准物质的制备：取步骤1）制备的保存液2 μL于200 mL志贺氏菌增菌肉汤中，41.5±1 ℃下进行培养，并利用多功能酶标仪定时取样测定培养液的OD_{600 nm}值，当OD_{600 nm}为0.270±0.1时停止培养，得新鲜菌液，然后将新鲜菌液按混悬液体积浓度1%加入到步骤3）制得的混悬液中，于台式恒温振荡器上300r/min摇匀30min，再按2mL/瓶进行分装，其含菌量为8.4×10²~2.5×10³CFU/mL，最后经冷冻干燥，制得标准物质；

5）检验：将所得标准物质进行菌种鉴定、均匀性验证、定值、稳定性检验，制得成品。

步骤1）所得保存液的平均菌数为4.3×10⁷CFU/mL。

步骤2）所用鸡肉需先经检测不含抗生素；所用⁶⁰Coγ的辐射剂量为6KGY。