[发明专利]基于LRBA基因检测抗CTLA-4抗体药物疗效的试剂盒

权利要求书

1.一种基于LRBA基因检测抗CTLA-4抗体药物疗效的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：

(1)核酸释放剂：为一种无菌水溶液，由60～100mmol/L的氯化钾、0.01～2wt％的十二烷基磺酸钠和0.05～1wt％的乙醇组成；

所述百分比以无菌水的质量为计算基准；

(2)内标，序列为：

5’‐CTGGACTTAAATCCTATTGTTCCAGTCCTGTCATCCAGTTAGCTGACTCACGTATTCGTAGCCACCCTTCTGGAGGTGCAATCTAACCTATGTCATCAG‐3’；

(3)PCR反应液，包括以下三组由用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针组成的组合物，所述三组组合物分别为：

组合物1:上游引物11：5’‐TGGCCTCAAGCAGTTCTCCCACTTTG‐3’

下游引物12：5’‐TACCCCCTTTACCAGTCATTGTCTTC‐3’

探针13：5’‐TGGATTCTAATCCTCAAGATATCCACCC‐3’

组合物2：上游引物21：5’‐TACATAGGGTTTGACTTTATTATTT‐3’

下游引物22：5’‐GTCTCAGCCTGCAGAGTAGCTGGG‐3’

探针23：5’‐TAGAGACAGGGTTTCCCCATGTT‐3’

组合物3：上游引物31：5’‐ATTACAGGTGCCTGCCACCATGCCT‐3’

下游引物32：5’‐CCTTTCACCTATCGCACGAGTATCAT‐3’

探针33：5’‐TTTTTGTTTTGCTCTTGTCATTACTGGAG‐3’；

其中组合物1针对6745G>T，组合物2针对7516C>T，组合物3针对7604C>T；

所述PCR反应液中还包括用于内标检测的上游引物、下游引物和探针，其序列分别为：

内标上游引物：5’‐GACCAGCTCCATCCTAAGGTTCCAG‐3’

内标下游引物：5’‐CTGATGACATATTTGAGATTGCACC‐3’

内标探针：5’‐TTGCTGACTCACGTATTCGTAGCCCA–3’；

所述PCR反应液中还包括脱氧核糖核苷三磷酸dNTP；

(4)酶混合液：包括耐热DNA聚合酶1～5U/μl和尿嘧啶DNA糖基化酶0.5～2U/μl；

(5)LRBA阳性对照：为针对3种突变位点所在区域合成质粒的混合物，以及包含内标目的序列片段的质粒，其中组合物1针对6745G>T，组合物2针对7516C>T，组合物3针对7604C>T；

所述阳性质粒序列为：

AGAGGTTACCCTGCGCCTAGAACCTGCACGAGAGTGGGGGAGGAGTGAGCCTGTTCGGGGGCCTCTTGGACCTGCCTTCACCCAGAACCCAGCTTTTTGAGCCCGGGAGAAGCGGGTGGCTAGTAGTGGGGTGCCTTTAGTAACTTACTTGACCGACAATAACTATTTCCCTCTTGTCCCCTCAAAACCCTAAAACAAAACCTAGCCTATTTAACATATATTTAATCTTCCAATAGGGTTTGGCGTTGTTGTCAGCCTCGGGGAGAGAGATTGGACAAATATTCTCCAAGAGGAGGAGGGCGACGCCAAGGACTTTCCACATCAACTGCTTTGGGGTATCTCCACAAGTTGGAAGAGGGACCCTTTCGTTTTGCATTGCGTGTGTTGTGCTCATTACCAGTGCAGCGACTGCCGTCCCAGGGTGACTCTGAGTTGTCCTTTATCGTGAGCTAGCAATGGCTAGCGAAGACAATCGTGTCCCTTCCCCGCCACCAACAGGTGATGACGGGGGAGGTG；

(6)LRBA阴性对照：为以灭菌生理盐水稀释的内标目的序列片段的质粒。

2.根据权利要求1所述的基于LRBA基因检测抗CTLA-4抗体药物疗效的试剂盒，其特征在于，所述核酸释放剂中，十二烷基磺酸钠的浓度为0.1－0.5wt％。