[发明专利]氯虫苯甲酰胺胁迫下二化螟内参基因的筛选方法及应用

权利要求书

1.TF4基因作为定量检测二化螟在氯虫苯甲酰胺胁迫下体内与该杀虫剂解毒代谢相关基因表达量的内参基因的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，检测二化螟体内与杀虫剂解毒代谢相关的基因表达量的方法为实时荧光定量PCR。

3.根据权利要求1或2所述的用途，TF4基因为SEQIDNO:10所示的片段。

4.根据权利要求2所述的用途，与杀虫剂解毒代谢相关的基因为P450基因。

5.根据权利要求4所述的用途，所述的P450基因为CYP6a2。

6.根据权利要求4所述的用途，P450基因为SEQIDNO:12所示的片段。

7.根据权利要求4所述的用途，P450基因所使用的引物序列为：正：TGACACCAAAAGGAGCGGAA，反：TGCACTCATCATCCGTTGCT。

8.根据权利要求7所述的用途，TF4基因所使用的引物序列为:正：TTTGATTACTAACGGGTGCA，反：TTCTTCAACTTCAAGCGAGA。

9.一种筛选氯虫苯甲酰胺胁迫下二化螟体内内参基因的方法，该方法包括：

提供备选的内参基因

以未处理的二化螟为对照，采用三个不同浓度的氯虫苯甲酰胺剂量对二化螟3龄幼虫进行胁迫处理，处理后收集二化螟样品，立即提取总RNA，测定RNA浓度，将RNA反转录合成cDNA，然后以各样品cDNA为模板，利用实时荧光定量PCR对所述备选内参基因进行验证，采用△Ct，RefFinder，BestKeeper，GeNorm，NormFinder软件进行数据分析，从而筛选出二化螟3龄幼虫体内在氯虫苯甲酰胺胁迫条件下最稳定表达的内参基因。

10.一种检测P450基因在二化螟被氯虫苯甲酰胺胁迫后的定量表达量的方法，该方法包括：以TF4基因为内参基因，检测P450基因在二化螟被氯虫苯甲酰胺胁迫后的定量表达量，其中定量表达量的方法为使用实时荧光定量PCR进行检测。

11.根据权利要求10所述的方法，3龄幼虫为实验材料，氯虫苯甲酰胺胁迫浓度为：50ppm，100ppm，200ppm，处理时间为3天。

12.根据权利要求10所述的方法，TF4基因为SEQIDNO:10所示的片段。

13.根据权利要求10所述的方法，P450基因为SEQIDNO:12所示的片段。

14.根据权利要求10所述的方法，P450基因的引物序列为：正：TGACACCAAAAGGAGCGGAA，反：TGCACTCATCATCCGTTGCT；TF4基因引物序列为:正：TTTGATTACTAACGGGTGCA，反：TTCTTCAACTTCAAGCGAGA。