[发明专利]人源蛋氨酸亚砜还原酶A表达基因、载体、菌株及方法有效
| 申请号: | 201510796321.1 | 申请日: | 2015-11-18 |
| 公开(公告)号: | CN105238798B | 公开(公告)日: | 2018-11-13 |
| 发明(设计)人: | 樊锋凯;曾建华;李欢欢 | 申请(专利权)人: | 武汉华肽生物科技有限公司 |
| 主分类号: | C12N15/53 | 分类号: | C12N15/53;C12N9/02;C12N15/70;C12N1/21 |
| 代理公司: | 武汉东喻专利代理事务所(普通合伙) 42224 | 代理人: | 胡星驰 |
| 地址: | 430000 湖北省武汉市武汉东湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 蛋氨酸 亚砜 还原酶 表达 基因 载体 菌株 方法 | ||
1.一种人源蛋氨酸亚砜还原酶A的表达基因,其特征在于,所述人源蛋氨酸亚砜还原酶A的表达基因为:由SEQ NO.1所示的DNA序列编码的基因。
2.一种人源蛋氨酸亚砜还原酶A的表达载体,其特征在于,所述载体包含如权利要求1所述的蛋氨酸亚砜还原酶A的表达基因。
3.一种人源蛋氨酸亚砜还原酶A的表达菌株,其特征在于,所述菌株为大肠杆菌,含有如权利要求2所述的蛋氨酸亚砜还原酶A表达载体。
4.一种人源蛋氨酸亚砜还原酶A的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)菌株培养:将如权利要求3所述的蛋氨酸亚砜还原酶A的表达菌株进行扩大培养,直至OD在0.5至0.7之间;
(2)诱导表达:将步骤(1)中培养的菌株,在以下条件下培养3小时至6小时获得诱导表达菌株,诱导蛋氨酸亚砜还原酶A表达:温度在20℃至30℃之间,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度在0.2mM至0.5mM之间,摇床转速在150rpm至220rpm之间;
(3)超声破碎:采用超声波脉冲破碎步骤(2)获得的诱导表达菌株获得破碎液;
(4)蛋白提纯:将步骤(3)中获得的破碎液进行蛋白提取和纯化获得蛋氨酸亚砜还原酶A。
5.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)的破碎条件如下:破碎脉冲持续3至5秒,间隔3至5秒,超声脉冲破碎20分钟至45分钟。
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