[发明专利]酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法与应用

权利要求书

1.一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相，其特征在于，其化学结构式为：

其中SilicaGel为硅胶，经表面修饰后带正电荷，糖类化合物为酸性单糖、酸性寡糖或酸性多糖，带负电荷。

2.一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，其具体步骤为：

(1)硅胶预处理

硅胶加入质量浓度为1～40％的盐酸或硝酸溶液中，加热回流搅拌1～48小时，过滤，水洗至中性，于100～160℃下干燥至恒重，得到活化硅胶；

(2)硅胶表面修饰

将步骤(1)所得的活化硅胶置于玻璃或者聚四氟乙烯反应容器中，在氮气氛围下加入有机溶剂，搅拌均匀，滴加硅烷试剂，保持温度为20～200℃条件下搅拌2～48小时。待反应体系冷却至室温，减压过滤并用甲苯、丙酮、甲醇水、甲醇洗涤，固体产品在60～100℃条件下干燥12～36小时，得到硅胶表面修饰的产品；

(3)硅胶表面带电修饰

将步骤(2)所得硅胶表面修饰的产品分散于乙腈溶液中，再加入N-甲基咪唑及相转移催化剂，搅拌均匀，保持温度为20～200℃条件下搅拌2～48小时；反应结束后减压过滤并用二氯甲烷、甲醇洗涤，固体产品在60～100℃条件下干燥12～36小时，得到硅胶表面带电修饰的产品；

(4)涂覆过程

将步骤(3)所得硅胶表面带电修饰的产品与酸性糖类化合物水溶液混合，搅拌均匀，保持温度为10～80℃条件下搅拌1～60分钟；反应结束后减压过滤并用水、甲醇洗涤，固体产品在60～100℃条件下干燥12～36小时，得到亲水色谱固定相。

3.如权利要求2所述的一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，

所述的有机溶剂为与水不互溶的有机溶剂，有机溶剂包括甲苯、乙苯、二甲苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、正辛烷、环己烷等苯系物和烷烃。

4.如权利要求2所述的一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，

所述的有机溶剂的使用量为每克活化硅胶使用2～100mL有机溶剂。

5.如权利要求2所述的一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，

硅烷试剂结构式为：

其中，X为-OCH₃，-OCH₂CH₃或-Cl，m＝1～12，A为-Cl；硅烷试剂的使用量为每克活化硅胶使用0.5～5mmol。

6.如权利要求2所述的一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，

所述的硅胶分散溶液的使用量为每克硅胶分散于2～100mL乙腈溶液，加入0.1～1gN-甲基咪唑及0.01～0.1g相转移催化剂。

7.如权利要求2所述的一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，

所述的相转移催化剂为常用的季铵盐相转移催化剂，包括苄基三乙基氯化铵(TEBA)、四丁基碘化铵(TBAI)、四丁基溴化铵、四丁基氯化铵、四丁基硫酸氢铵(TBAB)、三辛基甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基氯化铵等。

8.如权利要求2所述的一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(4)中，

所述的酸性糖类化合物为酸性单糖、酸性寡糖或酸性多糖等，包括葡萄糖醛酸、海藻酸钠寡糖、卡拉胶寡糖、卡拉胶多糖等等，分子量范围在100～200万之间。

9.如权利要求2所述的一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(4)中，

所述的酸性糖类化合物的使用量为每克硅胶使用0.01～1g，所配置的水溶液质量浓度为0.1％～10％。

10.一种酸性糖类化合物涂覆型亲水色谱固定相在极性化合物的分离和修饰蛋白质组学中的应用。