[发明专利]检测粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的试剂盒，其特征在于，包括的试剂有：校准品、质控品、生物素标记的粉尘螨过敏原溶液、碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的粉尘螨过敏原溶液的浓度为0.1~1.0ug/ml；所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的浓度为0.1~1.0mg/ml；所述碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液的浓度为0.1~2.0ug/ml。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品的浓度为：0IU/ml、0.35IU/ml、0.7IU/ml、3.5IU/ml、17.5IU/ml、50IU/ml、100IU/ml，所述校准品是IgE蛋白与0.1M、pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液配制得到的；所述质控品的浓度为：0.7IU/ml、17.5IU/ml，所述质控品是IgE蛋白与0.1M、pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液配制得到的。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述粉尘螨过敏原为能与人体内粉尘螨特异性IgE蛋白结合的抗原，所述生物素标记的粉尘螨过敏原溶液的制备过程为：将粉尘螨过敏原按1:20摩尔比加入到溶于二甲基甲酰胺的生物素中，再用0.1M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液透析得到。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标记的鼠抗人IgE二抗为能与人体内IgE蛋白特异结合的抗体，所述碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗溶液的制备过程为：将浓度为1.0-5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液与鼠抗人IgE二抗按摩尔比为2-10：1进行混合后并纯化，得到碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗，所述纯化是用pH为8-9的碳酸氢盐缓冲液平衡并洗脱，再紫外检测和记录纯化图谱，再用0.05M、pH值为6.0的MES缓冲液对碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE抗体稀释。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的制备过程为：将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀，再用0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液重悬，混匀磁分离沉淀，并重复清洗，清洗后的纳米磁微粒分散于0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。

7.提供一种纳米磁微粒化学发光法定量检测血清粉尘螨过敏原特异性IgE抗体的方法，其特征在于，包括步骤为：

（1）将磁微粒试剂、生物素标记的粉尘螨过敏原和待检样本混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第一溶液；

（2）向所述第一溶液中加入碱性磷酸酶标记的鼠抗人IgE二抗混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第二溶液；

（3）向所述第二溶液中加入发光底物并反应，测发光强度；

（4）利用已知浓度的校准品绘制发光强度标准曲线，根据步骤（3）得到的发光强度对照所述标准曲线，计算得出待测血清样本中粉尘螨特异性IgE的含量。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述反应的条件为37℃下反应15分钟，所述静置的时间为3分钟；步骤（1）中还包括对所述第一溶液用清洗液进行清洗，置于磁场中静置并去上清，清洗重复2次；步骤（2）中所述反应的条件为37℃下反应15分钟，所述静置的时间为3分钟；步骤（2）中还包括对所述第二溶液用清洗液进行清洗，置于磁场中静置并去上清，清洗重复2次；步骤（3）中所述反应的条件为37℃下反应5分钟，在化学发光分析/测定仪中测定发光强度。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法在全自动化学发光仪Lumiray系列上进行，所述Lumiray系列为Lumiray1200、Lumiray1220、Lumiray1260或Lumiray1280。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，包括步骤为：

（1）将所述试剂盒放入全自动化学发光仪的试剂仓里并进行识别；

（2）将校准品置于所述全自动化学发光仪的仪器样本仓，识别校准品信息，分配校准品位置；

（3）将质控物或待测样本置于仪器样本仓，编辑检测信息；

（4）启动运行程序，所有校准品/质控物/待测样本自动进行处理得到结果。