[发明专利]一种测定水产品中麻痹性贝类毒素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产品检测领域，具体的说涉及一种测定水产品中麻痹性贝类毒素的方法。

背景技术

麻痹性贝类毒素(PSTs)是水体中浮游藻类或微生物产生的一类水溶性极强的小分子次生代谢产物。其基本结构是两个胍基的四水化嘌呤多叠六元环。根据取代基团的不同，主要分为四类：①氨基甲酸酯类毒素(Carbamatetoxins)，包括石房蛤毒素(Saxitoxin，STX)、新石房蛤毒素(neoSTX，NEO)和膝沟藻毒素1-4(Gonyautoxins，GTXl-4)；②N-磺酰氨甲酰基类毒素(N-sulfocarbamoyltoxins)，包括GTX5(B1)、GTX6(B2)和C1-C4；③脱氨甲酰基类毒素(Decarbamoyltoxins)，包括dcSTX、dcneoSTX、dcGTX1-4；④脱氧脱氨甲酰基类毒素(Deoxydecarb-amoyltoxins)，包括doSTX、doneoSTX和doGTX1等，其中，氨基甲酸酯类毒素是较为重要的一类毒素。

PSTs是一类高效的钠离子通道神经毒素。当人体摄入了被PSTs污染的海产品后，临床初期主要表现为嘴、唇、舌发麻，四肢出现麻痹症状，感觉出现异常，人变得虚弱和混乱；后期主要表现为恶心，呕吐，呼吸急促，头痛发烧，吞咽困难，血压异常，严重者出现意识模糊甚至死亡。其中，氨基甲酸酯类毒素分布最广、毒性最强，其典型代表STX占PSTs分布的85％以上。N-磺酰氨甲酰基类毒素虽然其本身毒性较小，但是在生物体内极易通过生物转化脱去磺酰基和氨基甲酸酯链生成毒性很强的STX和脱氨甲酰基类毒素。另外，最新的生物转化实验发现并确认了在贝体内存在一类C1/C2毒素。

为保障公众不受PSTs的威胁，世界许多国家、地区及相关国际组织都已经对贝类水产品进行严格管理和控制，并制定了相应的贝类水产品及其制品的PSTs限量标准。不同于其他毒素的安全性评价是建立在毒素标准品本身的毒性评价，PSTs的限量标准是基于动物实验法的毒理学评价。

目前通行的生物体内PSTs限量标准是联合国卫生组织(WHO)依据小鼠试验法(MBA)得到的。该法的LOD值以及出现病理学特征的最低毒力为80μgSTXeq/100g，即400MU，MBA也被确定为PSTs安全性评价的标准方法。这个标准被包括我国在内的大多数国家所采用，也被认为是PSTs安全问题的最低标准。研究表明，虽然在自然环境以及单一生物体内并不包含目前已知的所有PSTs(目前已知一种生物体内最多检测到5-10种PSTs)，但是对于某些已发现的此类毒素，其性质我们并不清楚，也就难以对其进行安全及毒性评价。此外，不同的PSTs具有不同的毒性，某些毒素如N-磺酰氨甲酰基类毒素虽然其本身毒性较低，但是可以通过环境诱导或者生物转化形成高毒的分子形态，而在环境和生物体内这种转化十分常见。因此，由于PSTs具有毒性多样性和易变性的特点，使得对于这类毒素的精确定量检测出现了不小的难度。MBA法虽然是目前通用的标准检测方法，但是其灵敏度低和准确度差使得这种分析方法饱受争议。2009年，欧洲食品安全局建议将PSTs限量值控制在7.5μgSTXeq/100g以内，远远低于MBA的LOD。因此，必须找到具备更高灵敏度和准确度的合适检测方法替代MBA，为PSTs安全评价研究提供手段和前提。

目前，MBA和HPLC-FLD法已经成为英国食品标准局(FSA)、AOAC、美国贝类卫生管理计划(NSSP)等标准制定机构确定为PSTs的标准检测方法，已经建立相对成熟的监测体系。LC-MS法的出现被认为是MBA和HPLC-FLD法的合适替代者，因其对HPLC-FLD法耗时和操作难度大两大缺点做了明显的改善。目前国际上针对PSTs的LC-MS检测法仍存在一定的不足，如前处理方式对毒素各组分的回收率差异很大，没有合适的净化方法来很好的限制基质效应对组分测定的影响等。

因此有必要系统的建立了一套多组分PSTs的定量检测方法，以确保水产品质量安全。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定水产品中麻痹性贝类毒素的方法，该方法具体包括如下步骤：

(1)称取捣碎后的样品，加入提取溶液，涡旋及超声振荡提取后离心，上清液合并冷冻后，取出下层冷冻干燥至近干；

(2)复溶、用吸附剂进行净化，涡旋振荡离心，上层液过滤膜待分析；

(3)待测样品液通过液相色谱串联质谱仪进行麻痹性贝类毒素的定性定量分析。

其中所述的样品可以为扇贝、蛤蜊、贻贝等贝类水产品；