[发明专利]一种用于异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌发酵制备埃博霉素的培养基

说明书

本发明公开了一种用于异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌发酵制备埃博霉素的培养基，该培养基组分及含量为：酪蛋白胨10g/L，MgSO₄·7H₂O 1.0g/L，3‑(N‑吗啉基)丙磺酸钠盐2.07g/L，顺式‑9‑十八烯酸甲酯5‑15mL/L，苏氨酸0.8‑1.6g/L，甲硫氨酸0.5‑1.2g/L，丙酸钾1.0‑3.0g/L，微量元素溶液1mL/L，大孔吸附树脂XAD‑16 20mL/L。其显著的特点是添加了顺式‑9‑十八烯酸甲酯，L苏氨酸，甲硫氨酸和丙酸钾。实验证实，这种组成和优化显著提高了埃博霉素类化合物的发酵水平和效率，在利用异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌工业化发酵生产埃博霉素中具有良好应用前景。

技术领域

本发明提供一种专用发酵培养基，尤其涉及一种用于异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌发酵制备埃博霉素的培养基，属于抗肿瘤药物制备发酵培养基技术领域。

背景技术

埃博霉素(Epothilones)是一类极具应用前景的抗肿瘤药物。埃博霉素类化合物属于聚酮类的大环内脂化合物，对聚合微管有很强的稳定作用，作用机制和紫杉醇相似，并且在水溶性、细胞毒性和耐药性等方面优于紫杉醇，被认为是紫杉醇的更新换代产品，是更好的抗癌药物。

目前，埃博霉素的制备方法主要有化学合成法和生物合成法。化学全合成法由于步骤繁多，得率较低，与生物发酵法相比不具备成本优势，因此生物合成法成为埃博霉素生产制备的主流方向。

通过生物合成法制备埃博霉素主要有两个类别的发酵菌株：一是埃博霉素的原始产生菌纤维堆囊菌，主要存在的问题是菌株的生长代时较长(8-16h)而且遗传操作极为困难；第二类是异源表达博霉素合成基因的黄色粘球菌，该类菌株具有代时短(4h左右)，生长旺盛，不易污染，并且遗传操作便利，有利于后续的工程化改造等优点。Julien等人利用CMM培养基批次发酵异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌DZ1菌株，产物中埃博霉素A的产量最高约为0.05mg/L，埃博霉素B的产量最高约为0.33mg/L(Bryan Julien,SanjayShah.Heterologous expression of epothilone biosynthetic genes in Myxococcusxanthus.《Antimicrobial agents and chemotherapy》2002,第46卷(第9期))。但此发酵产量距离工业化生产的要求还有相当距离。目前，对于黄色粘球菌发酵制备埃博霉素的培养基组成和优化的相关文献报道较少，因此如何获得能够有效提高发酵产量与效率的、适用于异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌发酵制备埃博霉素的培养基成为亟待解决的课题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种能够用于异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌发酵制备埃博霉素的培养基，从而有效地提高埃博霉素的发酵产量与效率。

本发明所述用于异源表达埃博霉素基因的黄色粘球菌发酵制备埃博霉素的培养基(简称为OCM培养基)，其特征在于：所述培养基组分及含量为：酪蛋白胨10g/L，MgSO₄·7H₂O 1.0g/L，3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐2.07g/L，顺式-9-十八烯酸甲酯5-15mL/L，苏氨酸0.8-1.6g/L，甲硫氨酸0.5-1.2g/L，丙酸钾1.0-3.0g/L，微量元素溶液1mL/L，大孔吸附树脂XAD-16 20mL/L；其中，所述微量元素溶液配方是：MnCl₂·4H₂O 100mg/L，CoCl₂ 20mg/L，CuSO₄ 10mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 10mg/L，ZnCl₂ 20mg/L，LiCl 5mg/L，SnCl₂·2H₂O 5mg/L，H₃BO₃ 10mg/L，KBr 20mg/L，KI 20mg/L。