[发明专利]一种凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法，该凝血酶原时间测定试剂盒通过含有多种有效成分的缓冲液体系与兔脑粉和组织因子酯化物的结合，解决了单一成分试剂的敏感度不受控的问题，进一步得到准确性高、重复性强及稳定性好且适用于多种半自动/全自动血凝仪的凝血酶原时间测定试剂。

技术领域

本发明涉及一种体外诊断试剂盒及其制备方法，用于人血浆标本凝血酶原时间的测定。更具体地，是一种利用兔脑粉和组织因子酯化物制备的凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

医院临床实验室常规凝血实验，即凝血常规四项包括凝血酶原时间测定(PT)、部分活化凝血活酶时间测定(APTT)、凝血酶时间测定(TT)、纤维蛋白原浓度测定(FIB)，主要用于出血性疾病的筛查与诊断、血栓性疾病与血栓前状态检查、各种抗凝治疗监测以及手术前检查。其中，PT为反应机体外源性凝血途径的主要检测指标，常用于：1血液凝固异常可疑包括凝血酶原复合物多个因子(II、VII、X)，因子V，纤维蛋白原及去纤维蛋白原血症的筛选实验；2监测及调整维生素K拮抗剂，香豆素诱导剂的治疗；3监测维生素K缺乏及肝脏疾病；4术前筛选可能的止血异常疾病。

目前PT的临床检测多采用Quick法，其原理为在缺乏血小板的血浆内加入组织促凝血酶原激酶(组织因子)和Ca²⁺后凝血酶原转变为凝血酶，通过产生的凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。PT测定结果报告方式有三种：秒值、根据标准曲线计算的百分活度，国际标准化比率(international normalized ratio INR)。PT测定结果受众多因素的影响，其中凝血酶原试剂为最重要的影响因素。商品化的组织因子在敏感性上与WHO推荐的有所不同，因此生产商需要对每批试剂确定一个敏感因子，此即国际敏感指数ISI(international sensitivity index)，它用来表示试剂中组织凝血活酶相对活性的指数。不同来源的组织凝血活酶对凝血因子的敏感性不同，为了使不同敏感性的组织凝血活酶在PT检测中得到同样的结果，必须要制定一个共同遵循的敏感指标。WHO先后制备或发出了凝血活酶的多种国际参考品(IRP)，用已知ISI值的国际参考试剂与待测组织活酶试剂检测同一标本，对结果进行比较分析，就可得出试剂的ISI数值。

目前用于生产和出售的组织凝血活酶试剂必须标有ISI数值。PT测定影响因素很多，其中最关键的是凝血酶原试剂，由于所用凝血酶原试剂的敏感度不同，即使在相同条件下对同一标本测得的结果也不同，而我国医生常用的凝血酶原百分活动度则因为标准血浆不统一而相差更大，甚至达到难以比较的程度。因此WHO于1981年提出PT标准化报告方式为INR，INR＝(PTR)ISI，其中ISI为国际敏感度指数，PTR为PT测定秒值(s)与PT标准对照秒值(s)的比值。经上述公式换算成INR值后，能克服试剂之间敏感度差异的影响，使INR值报告方式具有可比性和可信度。国内多数文献报告人工心脏瓣膜置换术后采用国际正常标准化比值对口服抗凝药物治疗的监测，结果稳定、可靠，具有可比性。在口服抗凝药治疗中，华法林类药物是非常有效的抗凝药物，它在不同病人体内的新陈代谢率不同，因而它的剂量必须仔细监测，否则就会因超剂量而造成出血或因为剂量不足导致疾病复发，血栓形成。由此可见在凝血酶原时间的测定中，准确的INR结果对临床抗凝治疗药物的监测非常重要。但是不同ISI值的PT试剂测得的INR结果差异非常显著，而且当标本的INR值越高时，测定结果差异越显著。理论上，ISI值越接近1.0，表明试剂越敏感。

但是由于实验室使用PT试剂质量上的不同，使得同一个患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成检测结果的不一致，影响对疾病的正确、及时诊断。因此，PT试剂的质量成了获得准确结果及诊断的关键。同时，由于试剂复溶后的稳定性差，造成浪费，导致医疗单位成本增加，患者负担加重。所以研制一种安全、可靠、准确、稳定，保存时间长的PT试剂，对临床诊断疾病来说是十分必要的。

发明内容