[发明专利]一种鉴别克氏原螯虾不同家系的方法在审
| 申请号： | 201510751050.8 | 申请日： | 2015-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN105602946A | 公开（公告）日： | 2016-05-25 |
| 发明（设计）人： | 沈怀舜;胡亚成;马源潮 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 孙昱 |
| 地址： | 214081 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 克氏原螯虾 不同 家系 方法 | ||
1.一种鉴别克氏原螯虾不同家系所用的扩增引物，其特征在于，该引物包括10对特异 的微卫星引物，具体序列表如下：
。
2.一种鉴别克氏原螯虾不同家系的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）从待测的克氏原螯虾个体尾部肌肉中提取DNA；
（2）以步骤（1）得到的DNA为模板，分别用权利要求1所述的10对引物进行PCR扩增，得到 扩增产物；
（3）对步骤（2）得到的扩增产物使用聚丙烯酰胺胶进行电泳和银染；
（4）对步骤（3）的银染结果通过遗传分析软件进行分析，测量每个个体之间的遗传距 离，根据遗传距离绘制UPGMA聚类分析图，根据聚类结果区分不同氏原螯虾家系的个体。
3.根据权利要求2所述的鉴别克氏原螯虾不同家系的方法，其特征在于，步骤（2）中PCR 扩增的反应体系为15ul：Mg离子1.5ul、buffer1.5ul、4xdNTP0.5ul、一对引物各0.5ul、Taq 酶0.2ul、DNA2ul、超纯水8.3ul。
4.根据权利要求2所述的鉴别克氏原螯虾不同家系的方法，其特征在于，步骤（2）中PCR 扩增反应程序为：第一个程序为95摄氏度预变性2分钟，第二个程序循环35次，程序为95摄 氏度变性30秒，退火温度30秒，72摄氏度延伸1分钟，第三个程序为72摄氏度延伸10分钟，第 四个程序为4摄氏度保存。
5.根据权利要求2所述的鉴别克氏原螯虾不同家系的方法，其特征在于，步骤（3）中PCR 产物用12%的聚丙烯酰胺胶进行电泳和银染。
6.根据权利要求2所述的鉴别克氏原螯虾不同家系的方法，其特征在于，步骤（4）中所 述的遗传分析软件为population软件。
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