[发明专利]中药虎杖提取液中分离纯化白藜芦醇的方法

权利要求书

1.中药虎杖提取液中分离纯化白藜芦醇的方法，步骤包括发酵、提取、萃取、分离、纯化和干燥，其特征在于：具体步骤如下：

发酵：将中药虎杖粉末放入发酵池中，使用培养基进行发酵5～7天，使虎杖苷转化为白藜芦醇；

提取：将步骤1中的虎杖粉末连同发酵所得的发酵液转移至提取炉中，并加入浓度为80%的甲醇回流提取3次；每次加入甲醇的体积为发酵液体积的3倍，每次提取后过滤，合并3次过滤所得滤液，并回收甲醇；

向回收甲醇后的提取液中加入蒸馏水，搅拌，冷藏、静置24h后，过滤，获取滤液；所加蒸馏水的体积为提取液体积的6倍；

离心：将步骤3所得滤液进行离心处理，取上清液；

初步萃取：上清液中加入与上清液等体积的乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并3次萃取后的乙酸乙酯萃取层；干燥回收乙酸乙酯后所剩残留液，制得白藜芦醇粗品；

洗脱分离：加水溶解白藜芦醇粗品制得上样液；上样液上样于中压氧化铝层析柱，进行三次洗脱分离：第一次采用蒸馏水洗脱至无色，第二次用浓度为40～55%乙醇洗脱，第三次采用浓度为70～95%的乙醇洗脱；收集第三次的洗脱液，回收乙醇后进行浓缩，形成浓缩液；

精致纯化：使用超临界CO2萃取仪，对步骤6中获得的浓缩液进行沉析分离；超临界CO2萃取仪的压力为17～20MPa、温度为70～80℃，萃取时间在30～40min；

收集沉析产物，干燥，制得白藜芦醇。

2.如权利要求1所述的中药虎杖提取液中分离纯化白藜芦醇的方法，其特征在于：步骤6中第二次用浓度为55%乙醇洗脱，第三次采用浓度为95%的乙醇洗脱；步骤7中超临界CO₂萃取仪的压力为18.5MPa、温度为75℃，萃取时间在35min。

3.如权利要求1或2所述的中药虎杖提取液中分离纯化白藜芦醇的方法其特征在于：步骤1所述发酵微生物发酵。

4.如权利要求3所述的中药虎杖提取液中分离纯化白藜芦醇的方法其特征在于：所述培养基的原料包括虎杖内生菌。

5.如权利要求3所述的中药虎杖提取液中分离纯化白藜芦醇的方法其特征在于：所述培养基的原料包括碳源葡萄糖和氮源硝铵酸。