[发明专利]广谱抗果树病原真菌的解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及解淀粉芽孢杆菌菌株BacillusamyloliquefaciensYTB1407，还涉及该菌株对多种果树病原真菌室内拮抗活性及稳定性分析。

背景技术

果树病害是果树生长发育和结果过程中重要的影响因素，严重的制约了水果的产量和品质，每年给全球造成了巨大的经济损失。目前仍主要采用化学杀菌剂来防治果树病害，化学杀菌剂的优点是作用快、效果好、使用方便，能在短期内消灭或控制所发生的病害，有效减少损失，但大量化学杀菌剂的使用又使人类面临新的问题：大量的农药残留危害人畜健康，污染环境。因此，新型、高效、无毒的生物农药的开发和利用成为目前研究的热点。

拮抗菌作为一种生物菌剂，对环境安全，对人畜无威胁，可以有效的避免化学杀菌剂所带来的一系列问题。同时，目前许多研究表明许多细菌会对植物产生有益作用，如固氮、促植物生长、抗逆境等，使得拮抗菌成为病害防治的一条重要而有效的途径，更将是21世纪绿色食品生产中病害防治的主攻方向，具有广阔的应用前景。

芽孢杆菌是一种安全性高、生长繁殖速度快、抗逆性强的微生物菌株，目前广泛应用于生物农药、肥料及医学等方面。目前我国已经成功研发和并投入生产了多种芽孢杆菌商品制剂，主要防治粮食、蔬菜的纹枯病、白粉病、稻瘟病等真菌病害，而针对果树真菌病害的生物制剂很少。目前，研究者通过大量试验筛选到能够拮抗多种果树病原真菌的芽孢杆菌菌株，并初步取得显著成效。

发明内容

本发明的目的是提供了一种具有广谱抗菌活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用，其菌体和发酵液具有较强的广谱抗多种果树病原真菌的作用。

本发明涉及解淀粉芽孢杆菌BacillusamyloliquefaciensYTB1407应用于多种果树病原真菌的防治。即一种具有拮抗苹果轮纹病、苹果斑点落叶病、葡萄炭疽病、葡萄白腐病及葡萄霜霉病的解淀粉芽孢杆菌。

一种具有广谱抗菌活性的解淀粉芽孢杆菌，是从中国山东省烟台市福山区西洋参种植地采集的西洋参根中分离得到，保藏于中国典型培养物保藏中心，其简称为CCTCC，地址为：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心；请求保藏人：山东省烟台市农业科学研究院；保藏日期为2015年10月12日；保藏编号：CCTCCNO:M2015598，该菌命名为解淀粉芽孢杆菌BacillusamyloliquefaciensYTB1407。

本发明的解淀粉芽孢杆菌培养条件简单，在大多数培养基上生长良好，在牛肉膏蛋白胨琼脂平板生长时菌落为乳白色，中间有突起，表面不光滑，不透明，边缘为不规则形状，在多种培养基上均不产生色素。通过显微镜观察，该菌为革兰氏阳性菌，有的可见芽孢，芽孢中生，约1.0×3.0μm，菌体杆状，有鞭毛。该菌在葡萄糖发酵反应倒置试管有气泡出现，淀粉水解反应有透明水解圈生成，过氧化氢酶试验中呈阳性反应，销酸盐还原试验产生深红色物质，硫化氧反应呈阴性，V-P试验生成红色化合物，梓檬酸盐利用试验平板变蓝色呈阳性反应；耐盐性试验，在加入5%的氯化钠的平板上可以正常生长。

通过16SrDNA同源性分析，该菌株的基因组DNA为模板扩增其16SrDNA序列，PCR产物为单一条带，回收后纯化，进行DNA测序。该菌株的16SrDNA序列长度为1440bp，将该菌株的16SrDNA序列提交到GenBank数据库，获得序列号GenBankNO.KT799876。同时将该菌株的16SrDNA序列与GenBank数据库收录的代表菌株的16SrDNA基因核苷酸序列进行同源性比对，结果与解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌菌株的同源性均高达99%。进一步通过对该菌的gyrA基因片段的扩增、测序和序列同源性比对，结果与解淀粉芽孢杆菌同源性均高达99%，最终将该菌鉴定为解淀粉芽孢杆菌，并命名为BacillusamyloliquefaciensYTB1407。

解淀粉芽孢杆菌BacillusamyloliquefaciensYTB1407的应用中，所述菌体及发酵液发酵培养条件为：于100ml发酵培养基（容器为250mL三角瓶）中按体积接种2%的YTB1407菌株，转速150转/min，培养温度为30℃，培养4天。发酵培养基配方为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，水1000mL，pH7.0-8.0。