[发明专利]一种琼胶酶及其制备方法

权利要求书

1.一种琼胶酶，其特征在于：所述琼胶酶氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

2.一种琼胶酶基因，其特征在于：编码权利要求1所述琼胶酶；所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

3.包含权利要求2所述琼胶酶基因的重组载体，其特征在于：所述载体是大肠杆菌质粒或酵母质粒。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于：所述的载体为pPIC9k-Agarase。

5.一种包含权利要求2所述的琼胶酶基因的细胞，其特征在于：所述细胞选大肠杆菌细胞或酵母细胞；所述细胞由权利要求3所述重组载体转化而得。

6.根据权利要求5所述的细胞，其特征在于：所述细胞是包含所述琼胶酶核苷酸序列或用所述重组载体转化的大肠杆菌细胞或毕赤酵母细胞。

7.一种如权利要求2所述的琼胶酶基因的制备方法，其特征在于：所述琼胶酶的制备步骤包括：琼胶酶基因的获得：从海泥中筛选得到一株能在琼胶平板上产生透明圈的微生物，通过16srDNA分析鉴定为耐热微球菌(Microbulbiferthermotolerans)；利用琼胶酶氨基酸保守片段的简并引物，获得其一段琼胶酶的编码基因；再通过genomewalking获得其全长，并在NCBI数据库中进行比对分析，得到琼胶酶基因。

8.一种如权利要求3所述的琼胶酶基因的重组载体的制备方法，其特征在于：所述琼胶酶基因的重组载体的制备为：采用权利要求2所述琼胶酶基因编码序列经EcoRI和NotI双酶切后与EcoRI和NotI双酶切的pPIC9k载体连接，得到酵母重组表达载体pPIC9k-Agarase。

9.一种如权利要求5所述的的琼胶酶基因的细胞的构建方法，其特征在于：所述细胞是用所述重组载体转化来构建的；所述细胞选大肠杆菌细胞和酵母细胞，选用大肠杆菌和毕赤酵母构建表达琼胶的重组细胞。

10.一种如权利要求1所述的琼胶酶的制备方法，其特征在于：培养所述包含琼胶酶基因的细胞或包含琼胶酶基因的重组载体转化的细胞，诱导其表达，收获表达产物：通过包含本发明琼胶酶基因的酵母发酵来生产琼胶酶，并通过硫酸铵沉降，离子交换层析和凝胶层析纯化得到了纯酶形式的目的蛋白。