[发明专利]阴道毛滴虫α-actinin蛋白免疫保护性抗原、疫苗和应用

说明书

本发明属于疫苗制备技术领域，具体公开了阴道毛滴虫α‑actinin重组融合蛋白免疫保护性抗原、疫苗和应用；利用原核表达体系构建了可以大量稳定表达α‑actinin亚片段的表达菌株，同时纯化并获得ACT‑T蛋白，该蛋白作为抗原免疫感染阴道毛滴虫的小鼠后，小鼠在14天后基本痊愈，对小鼠的免疫保护作用接近100%，将ACT‑T融合蛋白作为抗原制成亚单位疫苗，从而实现对小鼠的免疫保护，该疫苗具有广泛的开发应用价值。

技术领域

本发明涉及疫苗制备技术领域，更具体地，涉及阴道毛滴虫α-actinin重组融合蛋白免疫保护性抗原、疫苗和应用。

背景技术

阴道毛滴虫是一种寄生于人体泌尿生殖系统的原虫。感染该虫之后会引起女性阴道炎、尿道炎、子宫颈炎；男性感染阴道毛滴虫后，发生前列腺癌的概率也比正常人群要高；阴道毛滴虫感染还会增加人群感染乙肝病毒、人型支原体以及艾滋病病毒的风险，也会引起孕妇早产以及新生儿体重偏轻，并且有可能在阴道分娩过程中传播给新生儿呼吸道。

阴道毛滴虫病呈全球分布，是最常见的非病毒性性传播疾病。然而由于缺乏对该病的充分认识和筛查计划，导致全球上百万病例未得报道及诊断，致使该病成为一种被忽视的性传播疾病。根据WHO评估，2008年全世界15至49岁年龄段的人群中，感染毛滴虫的患者约为2.764亿。相比2005年同年龄段的感染人数2.485亿，已上涨了11.2%。此外，虽然甲硝唑是目前治疗阴道毛滴虫感染的首选药物，然而，近年来除了逐渐发现甲硝唑有毒副作用以外，临床上还发现了不少甲硝唑的抗性株。由于阴道毛滴虫主要通过性接触直接传播，患者尤其是男性患者感染毛滴虫后又常为无临床症状的带虫者，可能导致其伴侣反复感染，导致交叉感染，扩大传播。因此，发展可持续控制的策略，例如疫苗的开发，就变得很有意义。而目前对于毛滴虫疫苗相关的研究非常有限。目前仅有研究人员用全虫为疫苗，或以阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白CP62为疫苗，接种小鼠鼻腔，在小鼠的毛滴虫感染阴道模型中都有一定的保护作用。然而，与大分子抗原相比，在亚单位疫苗中，由于分子相似性而引起的自体免疫的可能性更小，因此开发亚单位疫苗更安全。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供阴道毛滴虫α-actinin重组融合蛋白免疫保护性抗原。

本发明的第二个目的是提供阴道毛滴虫α-actinin重组融合蛋白免疫保护性疫苗。

本发明的第三个目的是提供上述免疫保护性抗原或疫苗的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

α-actinin重组融合蛋白ACT-T作为阴道毛滴虫病免疫保护性抗原的应用，其ACT-T的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

阴道毛滴虫α-actinin蛋白是一种结合于actin，分子大小为115Kda的蛋白，也是阴道毛滴虫细胞骨架重排中比较活跃的蛋白之一。该蛋白参与毛滴虫阿米巴形变，被认为与虫株毒力相关；并且阴道毛滴虫中最常见的免疫原就是α-actinin，可以引起了强烈的体液免疫反应，经常被发现存在于裂解的靶细胞表面。由于该蛋白强的抗原性及免疫原性，而α-actinin全基因较长，那么包含蛋白中间区域的核心抗原决定簇的亚克隆，则成为设计毛滴虫诊断与疫苗的良好选择。为获取大量纯化的目的蛋白，本研究利用BL21原核表达体系构建了可以大量稳定表达α-actinin亚片段的表达菌株，进行疫苗相关的研究。

由于α-actinin全长序列较长，在进行原核表达时多数表达为包涵体，申请人前期研究中构建了3段序列，分别是α-actinin全长序列、涵盖中间核心抗原决定簇的α-actinin全长序列前半段（ACT-F）和涵盖中间核心抗原决定簇的α-actinin全长序列后半段（ACT-T）；分别将这3段序列构建表达载体进行原核表达，虽然这三段序列获得的重组蛋白均具有免疫表现，但作为免疫原对动物进行免疫时，其免疫保护作于差别显著。